第13章 生化药物制造工艺(核酸药物).pptVIP

核 酸 药 物 nucleic acid medicine 依据化学结构和组成分类：分四类 依据结构特点及临床应用情况分类 具有天然结构的核酸类物质 如：肌苷、ATP、GTP、CTP、UTP、CoⅠ 等 来源：提取或发酵 特点：毒副作用小 自然结构碱基、核苷、核酸类结构的类似物 如：巯嘌呤、阿糖胞苷、聚肌胞等 来源：以核酸类物质为前体通过“化学法” 或“酶法”进行半合成 特点：毒性较大 RNA的生产 工业用RNA的提取 RNA制备 具有生物活性RNA的制备. 从核糖核蛋白中分离RNA (1)乙醇沉淀法： 核糖核蛋白 溶于NaHCO3 水相 用含辛醇的氯仿去蛋白 乙醇 RNA沉淀 (2)盐酸胍法： 核糖核蛋白 2～4盐酸胍38OC溶解 冷却至0OC 离心 RNA沉淀  DNA生产方法1.工业用DNA的提取 核苷酸的制备 酶水解: DNA或RNA为原料制备5′－核苷酸 常用的酶：橘青霉产生的5′－磷酸二酯酶 橘青霉培养液 压滤 酶液 【酶解】 除菌体 DNA溶液 酶解液 加热、调pH9.0 过滤 DNA降解液 【离子交换】 吸附于氯型阴离子树脂 分部洗脱 脱氧核苷酸 (dCMP、dAMP、dTMP、dGMP) RNA 降解 进一步分离 戊糖核苷酸 碱水解：可制备3’和2’－核苷酸 发酵法生产核苷酸 产氨短杆菌发酵生产肌苷酸（IMP）：腺嘌呤营养缺陷型 嘌呤核苷酸生物合成途径和代谢调控 R5P PRPP PRPP转酰胺酶 PRA IMP 分解 腺嘌呤阻遏 GMPAMPADPATP 反馈抑制 SAMP AMP ADP ATP XMP GMP GDP GTP 鸟嘌呤 PP GMPATP PRPP GTP 次黄嘌呤 鸟嘌呤GMP IMP积累的主要途径（前提） ◆保证IMP合成路线畅通： 保证关键酶PRPP转酰胺酶的活力---解除腺嘌呤及衍生物的组遏和反馈抑制 ◆阻断IMP的去路： 阻断SAMP合成 阻断IMP的分解 筛选获得缺乏SAMP合成酶的腺嘌呤缺陷菌株，提供亚适量的腺嘌呤。 ◆使积累的IMP渗透到细胞外： 增大细胞膜通透性 选育Mn2+不敏感的变异株 发酵法生产核苷 枯草芽孢杆菌嘌呤核苷酸合成途径 SAMP AMP IMP GMP XMP 3 4 5 6 7 8 黄嘌呤缺陷型 （II） 鸟嘌呤缺陷型（经诱变缺失4号酶） （III） AICAR SAICAR PRA PRPP 2 1 （一） （一） （一） （一） 1：PRPP转酰胺酶 2、7：SAMP裂解酶 3：IMP脱氢酶 4：XMP氨化酶 5：GMP还原酶 6：SAMP合成酶 8：AMP脱氢酶 当培养基中提供限量腺嘌呤时 Ⅰ 积累IMP 肌苷 Ⅰ＋Ⅱ 积累IMP 肌苷 Ⅲ 积累XMP 黄苷 枯草杆菌的磷酸单酯酶活力很强 ADP （Ⅰ） nucleic acid medicine