第5章 将DNA引入活.ppt

第五章 将DNA引入活细胞（受体细胞）;受体细胞：从实验技术上讲是能摄取外源DNA并使其稳定维持的细胞。从实验目的上讲是有应用价值和理论研究价值的细胞。 受体细胞的选择所遵循的原则： 1）便于重组DNA的导入 2）能使重组DNA稳定的存在于细胞中。 3）便于重组体的选择。 4）遗传稳定性高。 5）安全性高，无致病性。 6）受体细胞在遗传密码的应用上无明显的偏好。 ;重组DNA分子引入活细胞，随着活细胞的生长和分裂产生克隆 克隆的目的 A)产生大量的重组DNA分子 B）纯化目的分子 ;连接产物中包含的分子类型： 未连接的载体分子 未连接的DNA分子 自连的载体分子 重组的DNA分子 携带插入错误DNA片段的重组分子;5.1 转化—使细菌细胞获取DNA;5.1.2 大肠杆菌感受态细胞的制备;5.1.3 对转化细胞的选择（含目标质粒的细胞）;;5.2 重组体的鉴??;5.2.1 pBR322重组体的筛选—抗生素抗性基因的插入失活;缺点：需要两轮筛选;5.2.2 α互补（蓝白斑筛选，LacZ互补）;5.2.2 α互补（蓝白斑筛选，LacZ互补）;5.2.2 α互补（蓝白斑筛选，LacZ互补）;5.3 将噬菌体DNA引入细菌细胞;5.3.2 λ克隆载体的体外包装;5.3.2 λ克隆载体的体外包装;5.3.2 λ克隆载体的体外包装;5.3.2 λ克隆载体的体外包装;Lyse, mix;5.3.3 噬菌斑 ;5.4 重组噬菌体的鉴别;5.4 重组噬菌体的鉴别;5.4 重组噬菌体的鉴别;5.5 将DNA引入非细菌细胞;