第三章 抗体工程制药.ppt

第三章 抗体工程制药;抗体：动物免疫系统分泌的中和或消除抗原物质的影响的免疫球蛋白。;一个B 淋巴细胞可以繁殖为一个单克隆，但B 淋巴细胞在体外不能无限地分裂繁殖。;3.单克隆抗体的制备步骤;2）骨髓瘤细胞的选择;4）HAT培养基筛选杂交瘤细胞;6）单抗的大规模生产;第三节 基因工程抗体;基因工程抗体：采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。;二、基因工程抗体的应用;第四节 抗体的氨基酸顺序;两条重链(H)糖基化和两条轻链(L)非糖基化；每条重链和轻链分为氨基端(N端)和羧基端(C端)。;轻链（L）约220个氨基酸残基组成，分子量为24kD，有两个由链内二硫键组成的环肽，L链可分为：Kappa（κ）与 lambda（λ）2个亚型。;不同的H链与L链（κ或λ）组成完整的Ig分子。分别称为：IgM，IgG，IgA，IgD和IgE。;可变区??恒定区：H链或L链的N-末端序列变化很大，称为可变区（V区）； C-末端氨基酸则相对稳定，变化很小，称为恒定区（C区）。;可变区位于L链（VL）N端1/2处，H链（VH）N端1/5-1/4处。;高变区为抗体与抗原的结合位置，称为决定簇互补区（complementarity-determining region，CDR），VL和VH的HVR1，HVR2，HVR3又分别称为CDR1，CDR2，CDR3。;恒定区（constant region，C区）：L链C端1/2处，H链C端3/4-4/5处。 在同一种属动物中是比较恒定的，是制备第二抗体进行标记的重要基础。;铰链区和J链;依据抗体的氨基酸保守保守区域设计引物， 不同功能区的氨基酸变化，设计不同功能的 新型抗体。;1. 嵌合抗体 从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因，与人Ig恒定区基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人-鼠嵌合抗体。;（2）人源化抗体(改型抗体) 将小鼠的CDR（complementarity determinative region）序列移植到人抗体可变区框架中，产生的抗体称为CDR移植抗体。;（4）单链抗体 用基因工程方法，将抗体重链和轻链可变区通过一个连接肽连接而成的重组蛋白。 ;第六节 筛选抗体克隆的展示技术;M13噬菌体;在pⅢ和pⅧ衣壳蛋白的N端插入外源基因，形成的融合蛋白表达在噬菌体颗粒的表面，不影响和干扰噬菌体的生活周期，同时保持的外源基因天然构象，也能被相应的抗体或受体所识别；;（二）技术流程;2.特异性噬菌体抗体库的筛选和富集;（2）洗脱;2.酵母双杂交技术;被激活的转录因子一般采用报告基因。;;;;（2）酵母双杂交的组成;（3）应用;第八节 抗体药物; ;1975年K?hler and Milstein等首次利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体 (monoclonal antibody ,McAb)。;第三代抗体是基因工程重组抗体药物;二、已经上市的部分抗体药物;治疗性抗体发展历程和事件;抗体药物销售趋势图