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第六章 淀粉酶类的生产
第六章 淀粉酶类的生产; 淀粉是分布于自然界中最广的碳水化合物,其连接方式有直链淀粉和支链淀粉。直链淀粉的葡萄糖基本上是α-1、4键连接,聚合度为100~6000个葡萄糖单位;支链淀粉不仅有α-1、4键连接,还有α-1、6键连接(呈树枝状),聚合度比直链淀粉高。; 淀粉酶是催化淀粉(包括糖原、糊精)中糖苷键水解的一类酶,属于水解酶。是应用最早,最广泛的酶。占酶制剂总量的50%。
不同淀粉酶对直链淀粉和支链淀粉的作用方式不同,不同的淀粉酶对淀粉的作用有各自的专一性。淀粉酶分为四种类型:α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和异淀粉酶。还包括应用不是很广泛的环状糊精生成酶,G4、G6生成酶, α-葡萄糖苷酶等。; 第一节 α-淀粉酶的生产
α-淀粉酶生产采用的菌类有细菌和霉菌两类,分别为芽孢杆菌和米曲霉。米曲霉用固态培养,芽孢杆菌用液体深层通风培养。
一、α-淀粉酶的性质
1、pH对霉活性的影响
α-淀粉酶在pH5.5~8稳定,pH4以下易失活,酶活性的最适pH5~6。; 2、温度对酶活性的影响
纯化的α-淀粉酶在50℃以上易失活,在有大量Ca2+时,酶的热稳定性增强。
α-淀粉酶是各种酶中热稳定性较好的酶,其耐热性按动物α-淀粉酶、麦芽α-淀粉酶、丝状菌α-淀粉酶、细菌α-淀粉酶的顺序而增强。
; 3、钙与α-淀粉酶活性的关系
α-淀粉酶是单成分酶,大多数需要Ca2+保持酶分子的适当构象,来维持α-淀粉酶的最大活性和稳定性。
钙与酶的结合牢度是按霉菌、细菌、哺乳动物、植物的顺序而减弱。
除Ca2+外,Sr2+、Ba2+、 Mg2+等二价碱土金属也可使无Ca2+的α-淀粉酶恢复活性。
; 四、 α-淀粉酶的工业生产
1、菌种
α-淀粉酶生产菌株诱变选育路线图:
出发菌株(米曲霉2197 产酶148u/g)→紫外线→突变株(米曲霉ZLA16 产酶324u/g) →硫酸二乙酯→突变株(米曲霉ZLB35 产酶416u/g) → 钴60γ-射线→突变株(米曲霉ZLC06 产酶685u/g)→微波→突变株(米曲霉ZLD14 产酶788u/g)→亚硝酸→突变株(米曲霉ZLE09 产酶801u/g)→离子束→突变株(米曲霉ZLF13 产酶946u/g) 。 ; NTG是一种超诱变剂,它的诱发效率可使百分之几十的细菌发生营养缺陷型突变。因此经NTG处理的细菌不必经过青霉素浓缩处理,而只要通过适当的筛选方法就能检出营养缺陷型。一般讲,一种高效率的诱变剂,只要有一种有效的筛选方法是可以获得任何突变型的。NTG主要诱发GC—AT的转换。它除有较强的诱变作用外,还能诱发邻近位置基因的并发突变,而且特别容易诱发DNA复制叉附近的基因突变,随着复制叉的移动,它的作用位置也随着移动。; 2、生产概要
(1)霉菌α-淀粉酶固体培养法
(2)细菌α-淀粉酶液体深层培养法
(3)高活性α-淀粉酶的制备
(4)蛋白酶的去除
; 3、影响α-淀粉酶生产的因素
1)固体培养
(1)碳氮比
(2)温度
2)液体深层培养
(1)碳源的诱导及阻遏 (2)氮源
(3)碳氮比 (4)无机盐
(5)生长期与α-淀粉酶的生产
(6)温度 (7)pH
(8)通风量、搅拌强度、接种量、种龄等。; 4、α-淀粉酶的提取、浓缩、提纯、产品的稳定化
1)酶的提取
2)酶的浓缩回收
(1)盐析法
(2)有机溶剂沉淀法
(3)淀粉吸附法
(4)其他方法
3)α-淀粉酶的稳定; 5、固体培养法生产α-淀粉酶
1)固体培养枯草杆菌JD-32生产α-淀粉酶
2)固体培养米曲菌生产α-淀粉酶; 6、液体深层培养法生产α-淀粉酶
1)枯草杆菌BF-7658 α-淀粉酶的生产
(1)生产工艺流程
(2)菌种的选育
(3)扩大培养
(4)提取
盐析法、乙醇淀粉吸附法、喷雾干燥法; 2)食品级α-淀粉酶的生产
(1)菌种的处理及诱变
(2)培养
(3)提取
3)耐高温α-淀粉酶的生产
(1)菌种的处理及诱变
(2)发酵
(3)提取
; 五、 α-淀粉酶的应用
1、酶法糖化制造葡萄糖
2、织物的退浆
3、麦芽糖的生产
4、发酵工业中的原料处理
5、消化药物
六、 α-淀粉酶的测定; 第二节 β-淀粉酶的生产
β-淀粉酶又称为淀粉1,4-麦芽糖苷酶和外
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