利用基因工程手段提高丙酸菌的维生素B12的产量研究.pdfVIP

利用基因工程手段提高丙酸菌的维生素B12 的产量 1 2 2 1 朴永哲 ，山下光雄 ，室冈义胜 ，范圣第 1 2 （大连民族学院生命科学学院，辽宁 大连 116600 ； 日本大阪大学工学研究科） 摘要 化学合成维生素B12 需要经过70 多步化学反应，因此维生素B12 的生产只能通过微生物发酵并结合适 当的后期化学修饰来完成。为了提高维生素B12 的生产能力，笔者尝试了在丙酸菌上表达了与维生素B12 合 成有关的hem, cob 和cbi 等 10 个基因（组）。在丙酸菌转化株中，表达了cobA, cbiLF 或cbiEGH 时维生素 B12 的产量分别比对照株提高了1.7, 1.9 或1.5 倍，而cobU 和cobS 的表达对丙酸菌维生素B12 的产量无明 显影响。此外还成功地构建了丙酸菌的多基因表达系统，它们包括从Rhodobacter sphaeroides 的hemA 和丙 酸菌的内在基因hemB 和cobA。多基因表达系统转化株的维生素B12 产量达到1.7mg/L，比对照丙酸菌提高了 2.2 倍。 关键词 维生素B12，hem, cob, cbi, 丙酸菌 Production of Vitamin B12 in Genetically Engineered Propionibacterium freudenreichii 1 2 2 1 Piao Yongzhe , Yamashita Mitsuo , Murooka Yoshikatsu , Fan Shengdi (1 2 College of Life science, Dalian Nationality University, Dalian 116600, Liaoning China ; Department of Biotechnology, Graduate School of Engineering, Osaka University, Suita 565-0871, Osaka Japan) Abstract Since the chemical synthesis of vitamin B12 requires more than 70 steps, the production of vitamin B12 has been achieved by microorganism fermentation with additional brief chemical modifications. In an effort to develop the productivity of vitamin B12, I tried to express ten of hem, cobA and cbi gene involved in the synthesis of vitamin B12 by genetic engineered P. freudenreichii, which is one of microorganisms in vitamin B12 producer. In recombinant P. freudenreichii clone that harbored exogenous hemA gene, and endogenous hemB and cobA expression vector, we successfully achieved about 1.7 mg/L of vitamin B12, 2.2-fold higher than that in P. freudenreichii with pPK705. Key words v