刺糖多孢菌eryR基因的克隆与功能研讨.pdfVIP

分类号 密级 刺糖多孢菌eryR基因的克隆与功能研究 functionalresearchof and eryRgene Cloning ^J1- I ■ Irom6acctt aropotvsporaspmosa 指导教师姓名、职称 夏皇丛塾撞 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一一年六月 ≯。 摘 要 eryR基因是红色糖多孢菌(Saccharopolysporaerythraea)茵体形态 分化和红霉素合成的途径专一调控基因，该基因缺失的突变株，其红霉素 产量仅为原始菌株的1／7，并且形态分化也受到明显的抑制。过量表达eryR 基因，导致红霉素的产量提高20％。eryR蛋白是ery基因簇一个共同的 转录调控因子，它能够与整个ery基因簇的启动子结合，增强转录起始效 率，从而调控ery基因簇的表达，提高红霉素的产量。因此，我们尝试在 和红色糖多孢菌亲缘关系较近的刺糖多孢菌中，获得和eryR基因功能相 类似的调控基因。 spinosa) XSP01103中489 克隆到大肠杆菌(Escherichia Nde I和XbaI位点之间，转化E．coli IPTG诱导表达 BL21(DE3)，0．8mM 了20 kDa大小的重组蛋白。eryR．S蛋白质谱鉴定结果显示，该蛋白与来 源于红色糖多孢菌的eryR蛋白是同源蛋白，是一个潜在的转录调控因子 (putativetranscriptionalregulator)。 本研究选用本研究室构建的大肠杆菌．链霉菌穿梭表达载体pMF，将 I／Xba 来自刺糖多孢菌的eryR-s基因通过NdeI酶切位点克隆至pMF的 actff-ORF4／Pact，启动元件下游，通过接合转移试验转入天蓝色链霉菌 (Streptomyces lividans) TK24中。对两组原始菌株和各自的转化子进行固体平板培养和液体摇瓶 发酵培养，观察菌体形态，并测定次生代谢产物放线紫红素的产量。试验 有很大差别。接种R4C固体培养基，观察色素和孢子形成情况，发现转 制，并且色素形成的起始时间比两株对照菌都要早。 本研究首次从刺糖多孢菌中克隆了一个潜在的调控基因eryR-s，并且 在模式菌株天蓝色链霉菌和变铅青链霉菌中进行了初步的功能研究，为在 刺糖多孢菌中的后续研究工作奠定了基础。 关键词：刺糖多孢菌；eryR；放线紫红素；异源表达；接合转移 H ABSTRACT isa of ‘EryR pathway-specificregulatorygene gene and of the differentiation morphological synthesis erythraea，regulating