4株对虾肠道益生菌的筛选及鉴定精选.pdf

维普资讯 第 39卷 第 4期 海 洋 与 湖 沼 VO1．39．NO．4 2008 年 7 月 OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA July,2008 4株对虾肠道益生菌的筛选及鉴定冰 李海兵 ，2 宋晓玲 韦 嵩 ，2 李 赞2 兰 萍 (1．中国水产科学研究院黄海水产研究所 青 岛 266071；2．中国海洋大学生命科学与技术学部 青 岛 266003) 提要 采用体外拮抗试验 的方法，先从不同生长阶段的对虾肠道 中分离的96株细菌 中筛选 出4株 对病原菌(鳗弧菌、副溶血弧菌、哈维 氏弧菌)有拮抗作用的细菌；进一步通过 固体扩散法和液体混合 法确定 LV060806、LV060808的产物对鳗弧菌有明显抑制作用，LV060806、LV060815的产物对副溶 血弧菌有 明显抑制作用，LV060810、LV060815的产物对哈维氏弧菌有明显抑制作用。溶血试验证实 这些菌株不产生溶血素，不具有潜在 的致病性；动物安全性实验证实菌株浓度在 10。cfu／ml以下对实 验对虾无 明显的毒害作用。随后测定 了其 16SrRNA基 因序列，分析了相关细菌相应序列的同源性， 构建 了系统发生树，结合菌株表型特征和生理生化特性最终鉴定结果为：LV060806、LV060808为 Vibrionatriegens；LV060810、LV060815为 alginolyticus。 关键词 益生菌，筛选，鉴定，抑制作用，安全性实验 中图分类号 $963．73 20世纪，抗生素的发现促进了人类医学的巨大进 分离筛选 了几株具有抑制病原菌作用的拮抗菌，并 步，自此抗生素成为抗菌治病的首选药物。大量的抗 对其进行了分类学鉴定及安全性试验，以期为功能 生素被广泛应用，使动物养殖业尤其是水产养殖业不 益生菌的应用 、高效免疫活性物质的开发 以及对虾微 断受益。在药物和技术不断革新的基础上，高密度 、 生态制剂的研发奠定重要基础。 集约化 、规模化、工厂化的养殖模式 日趋成熟，水产 1 材料与方法 动物养殖业一度发展迅速(Graveetal，1995)。但随之 而来的病害大量传播、抗生素肆意滥用、养殖环境恶 1．1 细菌的分离与培养 化、病原耐药性增强、养殖动物药物残留等问题也 日 从健康 的不 同生长阶段 的中国对虾 (Penaeus 益为人们所关注(Sambasivametal，2003)。开拓和发展 chinensis)及凡纳滨对虾 (Litopenaeusvannamei)肠道 符合环境友好和可持续发展战略的病害防治技术和产 内，分离到 96株对虾体 内细菌作为体外拈抗试验的 品已经成为水产养殖业的迫切需求(Paulyetal，2002)。 待测菌株。指示菌株为本实验室分离和鉴定的对虾病 益生菌(probioticbacteria)，特别是来源于对虾 内 原菌株，包括鳗弧菌(Vibrioanguillarum)、哈维氏弧菌 外环境的益生菌，由于其在改善养殖水环境、抑制病 ( harveyi)、副溶血弧菌(p口，． 口PD “)，以及 原微生物的生长、改善对虾健康状况 、促进对虾生长 、 金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocusaureus)和微球菌 提高饲料利用率等方面的突出作用，引起越来越多 (Micrococcuscohn)。待测菌株、指示菌株均用2216E 的关注 (Gatesoupe，1999)。对虾益生菌的筛选 、应用 海水琼脂培养基常规培养，并用含 15％甘油的2216E 和作用机制的研究，成为海洋微生物研究的重点(李 液体