二、基因工程基本知识及基本技术PPT.ppt

第二章 基因工程的基础知识及基本技术;A 有关基因的基础知识;第一节 基因的结构特点;一、原核生物基因结构特点;二、真核生物基因结构特点;二、真核生物基因表达;第三节 操纵子学说;乳糖操纵子基因表达调控模型;二、操纵子调节的类型;B 基因工程的支撑技术;第一节 DNA的提取与纯化;一、质粒DNA的提取;闭合环状的质粒DNA，在变性后不会分离，复性快；;;（2） 所用的试剂作用;③EDTA;冰醋酸把醋酸钠溶液的pH调到4.8。 用来中和NaOH变性液，使DNA复性。;⑦ RNase A;蛋白变性剂，进一步抽提DNA溶液中的蛋白质，使蛋白质沉淀,但苯酚会残留在DNA溶液中。 （现多用各种商品化的层析柱纯化DNA)。;（3）碱抽提法提取质粒DNA的步骤 ;溶液II 破坏细胞膜，蛋白质和DNA变性。;上清液中含有闭合质粒DNA。;最重要的是：;这是直接决定DNA产量的重要因素之一。;二、基因组或其他DNA的提取;动物组织剪成小块，置液氮中冻结后研磨成细粉末。 组织培养的细胞用胰酶消化松散后直接使用。;（3）纯化DNA;（1）组织粉碎;;三、DNA的定量和纯度测定;;;一般使用琼脂糖凝胶电泳，与已知分子量的DNA标准混合液对比得知。;DNA ladder;1. 带电荷的分子在电场中会以一定的速率向与其电荷性质相反的电极移动，速度称为电泳迁移率。 2. 电泳迁移率同电