HPLC操作流程精选.ppt

2012.11.12 Waters 2695-2487 高效液相色谱仪 仪器组成与主要功能 Waters2695 主机 （高精度四元梯度泵、自动进样器等）+ Water 2487 双通道紫外检测器 + Waters Chemstation 色谱管理软件。 用于对紫外有吸收的可溶性有机化合物、生物化合物等样品的定性、定量分析，给出可靠数据。 一、开机前的准备工作 1．检查设备电源、流路、信号连接是否完好； 2．流动相：配制相应的流动相，经 0.45um 微孔滤膜抽真空过滤后 3．样品溶液：按方法取样或配制标准样品溶液，0.45um 滤膜过滤。 二、开机平衡系统： 1．开机自检：打开电源开关，仪器开始自检（4-5min） ，待屏幕上方出现“Idle”自检完成。 2． 脱气： 按面板右下方“Diag”键，选择“other tests” ，移动光标至“Degasser”，打开在线脱气。电脑上也可操作。 3．清洗柱塞杆：按下排功能键“Diag”，然后再按下排功能键“Prime Seal Wsh”（填装密封塞杆），“Start”，冲洗 1~2min 后，“HALT”（停止），“CLOSE”。 4． Dry Prime干启动 当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“Status（1） Function]， 光标选中 “Dry Prime” 按[Enter]，显示“Dry Prime” 屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如[Open A]，光标选“Duration” ，按数字键输入时间（一般为 5 分钟） ，按[Continue]，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。 5、Wet Prime：在“Status”界面中“Composition”下，选择将用到的溶剂通道为“100%”，按液晶屏 幕右下角“Direct Function”键，移动光标选择“Wet Prime”，“OK”，流速及时间可使用默认值， 也可自行设定（如：5ml/min，3min） ，“OK”即可。 将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次。 （也可各通道选 25%v 5ml/min，3min） 。 6．注射器排气泡及清洗：进入“Direct Function”界面后，选择“Purge Injector”，“OK”，默认数值为 6，“OK”。 7．清洗注射针：进入“Diagnostics”界面，按下排功能键之“Prime Ndl Wsh”，“Start”，默认 30 秒钟，“Close”，即可返回“Diagnostics”界面。 注：以上 4-7 为溶剂系统前处理过程，建议每天开机后依次进行。若发现注射器中有气泡，则 可重复 6）直至排除。 8．平衡柱子：在“Status”界面上，按流动相比例设定各通道溶剂比例后，再 Wet Prime 操作一 次，然后设置流速，平衡色谱柱 30-60min。 三、编辑仪器方法和方法组: 1．打开电脑双击桌面上的 Empower，输入用户名 system、密码 manager 。 2、创建项目 选择配置系统，菜单栏文件—新建—项目—下一步—命名—完成 3．创建方法与方法组 创建方法：选择运行进样，仪器方法--编辑 2695 的参数：单次输送体积（建议 130） 、针头深度 0、脱气设置开、泵模式（等度/梯度）、柱温。 2489 配置：通用（灯开启、波长）—文件 —另存为（输入方法名 XX）-保存-退出。 创建方法组：选择所需的方法名称，点击下一步—输入方法组名（与方法名一致） 。 四、进样： 1．待“仪器方法-监视器”基线稳定后，点击“中断”开关，进入“进样”阶段。 2．当进行单进样时，在“运行样品”的“单进样”界面中输入“样品名”“功能”“方法组”“进样体 积”“运行时间”等；“单进样”就是单次进样，完成分析后即停止检测（流动相正常走动） ； 3．当多进样时，在“运行样品”的“样品”界面点击“样品瓶”输入所有样品分别所在位置（输入所 在编号） ，“进样体积”、“进样数”、“功能”、“方法组”、“运行时间”等。 五、 样品管理系统的准备 A管带黄色标记、B管带蓝色标记号、C管带红色标记、D管带绿色标记， 可固定泵如下：A为甲醇、B为分析用流动相，C为 乙腈、D为水。当分析样品时可把 B瓶换上流动相，D换上新过滤并脱过气的水，适当的流动相比例可随时调整，当分析结束后，B瓶和D换上甲醇并排气。 * Waters 2695-2487 高效液相色谱仪 操作步骤 *