芒果甙对柔红霉素中毒心肌细胞SERCA2α、PLB表达的影响.docVIP

精品论文 参考文献 芒果甙对柔红霉素中毒心肌细胞SERCA2α、PLB表达的影响 余邦伟 彭志刚（通讯作者） 殷万斐（广西医科大学第一附属医院血液内科 广西南宁 530021） 【摘要】目的：利用柔红霉素复制新生大鼠心肌细胞中毒模型，观察芒果甙对中毒心肌细胞SERCA2alpha;及PLB表达的影响，探讨芒果甙保护心肌细胞的机制。方法：取原代培养心肌细胞以4mu;mol/L柔红霉素（Daunorubicin, DNR）建立心肌细胞中毒模型，以不同浓度芒果甙(25、50、100mu;mol/L)干预，用RT-PCR方法检测心肌细胞肌浆网Ca2+-ATP酶（SERCA2alpha;）及磷酸受钙蛋白（PLB）的mRNA表达水平的变化，用免疫组化方法检测Ca2+-ATP酶（SERCA2alpha;）及磷酸受钙蛋白（PLB）的蛋白水平的变化。结果：与空白对照组相比，柔红霉素模型组SERCA2alpha;mRNA及蛋白的表达减低(Plt;0.01)，而其PLBmRNA及蛋白的表达增高(Plt;0.05)；与柔红霉素模型组相比，各浓度芒果甙给药组能增加SERCA2alpha;mRNA及蛋白的表达，降低PLBmRNA及蛋白的表达（Plt;0.05）。结论：芒果甙能影响SERCA2alpha;、PLB的表达，这可能是芒果甙能减轻柔红霉素诱导的心肌毒性的机制之一。 【关键词】芒果甙 柔红霉素 钙超载 SERCA2alpha; 磷酸受钙蛋白（PLB） 【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）04-0044-02 柔红霉素（DNR）是一种临床上常用的蒽环类抗肿瘤药物，但随着其药物剂量的加大，心脏毒性发生率也随之增高，限制了其在临床上的应用。目前，蒽环类化疗药物的心脏毒性的具体机制尚不十分清楚。研究表明，由蒽环类化疗药物引起的心肌细胞内钙超载是导致心脏毒性的机制之一。钙超载可以促进活性氧的生成，并促进心肌细胞凋亡，导致心肌细胞能量代谢异常。Ca2+在心肌兴奋-收缩耦联中起关键作用。SERCA2alpha;是心肌细胞肌浆网上的Ca2+-ATP酶，是心肌Ca2+调控的重要机制。PLB是对SERCA2alpha;直接发挥调节作用的钙调节蛋白，PLB能降低SERCA-2alpha;与Ca2+的亲和力从而抑制SERCA2alpha;活性。阿霉素（DOX）能下调心肌细胞肌浆网Ca2+-ATP酶的表达[1]。本研究选用体外培养新生SD大鼠心肌细胞复制DNR中毒模型，观察芒果甙对DNR中毒心肌细胞SERCA2alpha;、PLB表达的影响的影响，探讨芒果甙保护心肌细胞的机制。 1 材料与方法 1.1 主要试剂 DMEM/Haf12培养基购自Hyclone公司、胎牛血清购自杭州四季青公司，胰酶购自Solabio公司，总RNA提取试剂盒购自TIANGEN公司，cDNA第一链合成试剂盒及SYBR Green qPCR Master Mix购自Fermentas公司，免疫组化二抗试剂盒、DAB显色剂、SERCA2alpha;、PLB抗体购自武汉博士德公司，芒果甙由广西民族医学院研究所中心实验室提供，纯度为99.5%，2%NaHCO3配制10mmol/L，-20℃冻存。 1.2 实验动物 出生1-3天SD大鼠乳鼠，雌雄不限，由广西医科大学实验动物中心提供。 1.3 方法 1.3.1 DNR中毒心肌细胞模型的建立及实验分组 参照文献方法[2]体外培养大鼠心肌细胞， 培养至细胞生出伪足连接成片后供实验用。将体外培养的心肌细胞随机分为5组（n=10）：空白对照组、DNR模型组（将DNR加入培养液中，终浓度为4mu;mol/L）、25mu;mol/L芒果甙+DNR模型组（芒果甙组1）、50mu;mol/L芒果甙+DNR模型组（芒果甙组2）、100mu;mol/L芒果甙+DNR模型组（芒果甙组3）,药物干预24小时。 1.3.2 RT-PCR检测SERCA2alpha;和PLBmRNA表达 用Trizol抽提心肌细胞总RNA，再逆转录为cDNA，以此cDNA为模板进行PCR扩增。取PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，将SERCA2alpha;、PLB和beta;-actin所测灰度值之比作为SERCA2alpha;、PLB表达数值进行半定量分析。 1.3.3 免疫组织化学的方法(SABC法)检测SERCA2alpha;、PLB蛋白表达 取灭菌的盖玻片分别放入培养板中，滴心肌细胞