芒果苷对人鼻咽癌CNE2细胞生长的抑制作用.docVIP

精品论文 参考文献 芒果苷对人鼻咽癌CNE2细胞生长的抑制作用 潘莉莉 王爱妍 凌敏（广西医科大学 广西南宁 530005） 【摘要】目的 观察芒果苷对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的影响。方法 采用倒置显微镜观察芒果苷对人鼻咽癌CNE2细胞形态学的影响；采用CCK8法检测芒果苷对人鼻咽癌CNE2细胞生长的影响。结果 加入芒果苷作用后，人鼻咽癌CNE2细胞形态发生改变，细胞变小变圆，核固缩，细胞离壁，聚集成团。集落形成受到抑制，细胞数量不再增加。随着芒果苷浓度的增加，细胞增殖受到不同程度的抑制，其抑制率也随之增大，其中200 mu;mol/L芒果苷作用细胞5天的抑制率为55.9%。结论 芒果苷对人鼻咽癌CNE2细胞增殖有抑制作用，且呈现剂量、时间-效应关系。 【关键词】芒果苷 鼻咽癌细胞 增殖 抑制 【中图分类号】R96 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）21-0038-02 鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma, NPC）是指发生于鼻咽腔顶部和侧壁的恶性肿瘤，是我国南方及东南亚地区高发的一种恶性肿瘤，年发病率为10—50／10万[1]。芒果苷(Mangiferin)是从芒果树叶中提取的天然黄酮类化合物。芒果苷具有多种重要的生理活性和药理作用，如抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、免疫调节、抗糖尿病等[2]。不同肿瘤细胞对药物的敏感性不同,为了解芒果苷对鼻咽癌是否也存在抑制作用,本研究通过运用体外细胞培养法，经不同浓度的芒果苷处理人鼻咽癌CNE2细胞，观察芒果苷对细胞增殖的影响。 1 材料与方法 1.1 材料 人鼻咽癌细胞CNE2为人低分化的鼻咽鳞状细胞癌，来自广西医科大学实验中心。芒果苷为实验室自行提纯的，经液相色谱鉴定纯度为97.4%。RPMI1640、0.25%胰酶消化液培养液购自GIBCO公司。胎牛血清购自Hyclone公司。二甲基亚砜（DMSO）购自美国Sigma公司。Cell Counting Kit-8(CCK-8) 购自日本DojinDo公司。 1.2 方法 1.2.1 细胞培养与制备 采用常规体外培养，将人鼻咽癌CNE2细胞置于含10%胎牛血清、100U青霉素和链霉素的RPMI 1640完全培养基中,于37℃、5%CO2饱和湿度二氧化碳细胞培养箱（美国Thermo Forma公司）内培养。隔天换一次培养液。取对数生???期的细胞用于实验。当细胞密度达70-80%时，加入0.25%胰酶进行消化，加入4ml培养液吹打成，制备成单个细胞悬液。 1.2.2 药物培养液的配制 准确称取168.92mg芒果苷，用2ml DMSO溶解，配制成200UM药物母液，加入无酚红的RPMI 1640完全培养基中，最终配制成浓度为0mu;M、12.5mu;M、25mu;M、50mu;M、100mu;M、150mu;M、200mu;M的芒果苷培养液，其中含0.01%DMSO。以不加药物培养液（含有0.01%DMSO）做空白对照。 1.2.3 倒置显微镜观察细胞形态学改变 将CNE2细胞接种于12孔细胞培养板，每孔约含105个细胞，培养24小时贴壁后，加入一系列含不同浓度的芒果苷培养液，以不加药物培养液的做空白对照。每组设2个复孔。在作用不同的时间点（1、3、5天），放置于倒置显微镜下观察不同浓度芒果苷作用下细胞形态及数量的改变。 1.2.4 细胞生长抑制实验 采用CCK-8法。将CNE2细胞接种于96孔细胞培养板，每孔约含103个细胞，培养24小时贴壁后，加入一系列含不同浓度的芒果苷培养液，以不加药物培养液的做空白对照。每组做5个重复。在作用不同的时间点（1、3、5天），从培养箱取出向每孔加入10mu;l CCK-8溶液，然后将培养板在培养箱避光孵育3小时，用酶标仪测定在450nm处的吸光度，并计算出抑制率。抑制率（%）= （1－ 实验孔吸光度/对照孔吸光度）times;100%。 2 结果 2.1 CNE2细胞形态学的改变 在倒置显微镜下观察，当加入一系列含不同浓度的芒果苷培养液作用1天后，相比对照组生长迅速的细胞，实验组细胞开始出现伪足回缩，细胞间隙轻微增大，生长放缓。作用3天时，各实验组细胞出现生长停滞，集落不再扩大，细胞间隙增大,胞质颗粒增粗，透明度降低，细胞轮廓改变，细胞变圆，体积变小,细胞核浓缩。芒果苷浓度越大的细胞组表现越明显。作用5天时，各实验组细胞出现皱缩，部分细胞聚