遗传学第十一章 重组DNA.pptVIP

第十一章 重组DNA;1．基因工程的概念 2．工具酶 3．载体 4. 重组DNA； 5．转基因生物;一、遗传工程概述: 广义遗传工程包括: 　 生化工程、蛋白质工程、细胞工程、染色体工程、细胞器工程、基因工程及酶工程等。 狭义遗传工程是指: 　 基因工程(重组DNA技术)。;１.概念： 　　重组DNA(基因工程)：在分子水平上，采取工程建设方式， 按照预先设计的蓝图， 借助于实验室技术将某种生物的基因或基因组转移到另一生物中去， 使后者定向获得新遗传性状的一门技术。;2. 重组DNA的发展： 1971年　史密斯（Smith H. O.）等人从细菌中分离出的一种限制性酶，酶切病毒DNA分子，标志着DNA重组时代的开始。 1972年　伯格（Berg P.）等用限制性酶分别酶切猿猴病毒和λ噬菌体DNA，将两种DNA分子用连接酶连接起来得到新的DNA分子。完成了世界上第一个体外重组DNA实验。 1973年　科恩（Cohen S.）等进一步将酶切DNA分子与质粒DNA连接起来，并将重组质粒转入E. cloi细胞中。 1982年，美国食品卫生和医药管理局批准，用基因工程在细菌中生产人的胰岛素投放市场。;1985年，转基因植物获得成功。 1986年，穆勒斯发明了PCR技术，专利转让达3亿美元。 1990 年9月14日是基因治疗的诞生日。在美国马里兰州的一个医疗中心进行第一例基因治疗临床试验。一个4岁的小女孩戴斯瓦(A.DeSilva)，患有严重综合免疫缺失症（SCID）。将腺苷酸脱氨酶（ADA）基因转入骨髓细胞，再送回病人体内，基因治疗SCID获得初步效果。 1994年，延熟保鲜的转基因番茄商品生产。;1996年 170万公顷，1997年1100万公顷，1998年2780万公顷，1999年3990万公顷，2000年4420万公顷，2001年5260万公顷，2002年5000万公顷。;2001年种植面积100万公顷的转基因作物： 大豆（3330万hm2，占全世界转基因作物的63%，均为抗除草剂大豆） 玉米（980万hm2 ，占19% ） 棉花（680万hm2 ，占13% ） 油菜（270万hm2 ，占5% ）； 水稻、小麦、花生、向日葵、 　亚麻、甘蓝、马铃薯、番茄、 烟草、南瓜和木瓜等50多种。;转基因棉花已经大规模商品化生产。 转基因棉花、大豆、马铃薯、烟草、玉米、花生、菠菜、 甜椒、小麦等进行了田间试验， 2004年我国的转基因农作物和林木已达27种。;3．重组DNA;重组DNA内容：;第一节 工具酶;限制性内切酶(restriction enzyme)：从核苷酸分子内部切割磷酸二脂键，而生成DNA片段。如：EcoR I、Hind III 首先，细菌细胞中发现限制-修饰系统（R-M）： 1）限制：降解外源DNA,防御异源遗传信息进入的手段(限制性内切酶)。 2）修饰：修饰外源DNA片段后,保留在新细胞中(甲基化酶)。;第Ⅰ类酶：有特定识别序列，切割部位无特异性 切割远离识别位点，甚至1000bp,随机切割。 第Ⅲ类酶：有特定识别序列，切割有特异性（在识别序列外，20bp） 切割可产生各种类型的单链末端。 第Ⅱ类酶：有特定识别序列，切割有特异性（在识别序列内） 识别序列有4、6、8个或更多核苷酸对。 ;5’ ----GAATTC--- 3’ 3’ ----CTTAAG---- 5’;5’ ----GGATCC--- 3’ 3’ ----CCTAGG---- 5’;限制性内切酶的命名：根据其来自的生物分类学上的属名、种名和菌株名来命名。 酶名称的第一个字母是属名的第一个字母，大写，斜体。 第二、第三个字母是种名的前两个字母，小写，斜体。 　 第四个字母是菌株名的前两个字母，大写或小写，正体。 最后，罗马数字，表示分离几种酶的编号， I、 Ⅲ ①. EcoR　I 来自大肠杆菌（Escherichia coli）； 　②. Hind　Ⅲ来自嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）。;二、连接DNA片断的酶;第2种：连接平端DNA的连接酶。 T4 DNA连接酶（图B） ;第3种：先加人工接头，形成粘端，再由DNA连接酶连接。 ;;PCR反应三个步聚(一个循环)： 变性：94~95℃使模板DNA双链变成单链； 复性：50~70℃下，引物分别与互补DNA单链互补配对； 延伸：在引物的引导和Taq酶作用下，72 ℃下合成模板DNA的互补链。;;;第二节 载 体;常用的载体包括三大类，即质粒、噬菌体、噬粒 质粒（常用的有pBR322、pUC系列）