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花粉杀手位点的上位性遗传互作引起水稻的雄性不育 Contents Materials and Methods Results Discussion 3 Abstract 1 2 4 1 摘要 1.1 在栽培稻(Oryza sativa)亚种籼稻和粳稻的种间杂交的杂种中，杂种雄性不育基因S24 通过等位基因间的相互作用，选择性地致使携带有粳稻等位基因S24-j 的雄胚子败育。 1.2 本研究作者分析了这种雄性不育是否仅仅由S24 单个座位引起的。结果发现S24 受到上位性的调控。 1.3 对BC2F1 群体进行QTL 分析，发现了一个位于水稻第2 染色体与S24 互作的、新的不育位点，该位点被命名为EFS（S24 互作因子，Epistatic Factor for S24）。 1 摘要 1.4 进一步的遗传分析表明当S24与粳稻的EFS 等位基因efs-j组合在一起的时候引起雄性不育。结果表明efs-j是一个孢子体隐性等位基因，籼稻显性等位基因EFS-i可以抵消S24引起的花粉不育。 1.5 本研究证明了一个新的遗传上位互作座位，是单座位等位基因互作引起的杂种雄性不育的一个重要的作用元件。这个发现为加深我们对杂种不育和小孢子形成的复杂分子机理的理解具有重要贡献。 2 材料和方法 2.1 植物材料 1）染色体交换片段置换系RCSSLs（携带有S24基因片段) the japonica variety Asominori ×the indica variety IR24 (Kuboet al.2002) 染色体交换片段置换系RCSSLs 2.2 表型鉴定 1）花粉的采集；花粉的固定染色；花粉的镜检统计； 2)每个植株统计超过300个花粉粒； 3）呈深红色的正常大小的饱满花粉粒为可育表型；呈浅红色或无色空瘪、畸形的花粉粒为不育表型。 4）在本研究中， 花粉可育率＞90％，为可育； 花粉可育率70％- 90％，为部分不育； 花粉可育率30％- 70％，为半不育； 2.3 DNA分析和连锁图谱的构建 1）DNA样品的准备； 2）引物的设计：根据日本晴和93-11的DNA序列设计得到SSR标记引物； 3）PCR反应：变性，94 ℃,20 S；退火，56 ℃,20 S；延伸，72 ℃,30-60 S；共30个循环。 4）PCR产物的电泳和数据统计； 5）连锁图谱的构建：应用Map Manager QTX version 0.30软件进行连锁图谱的构建。 2.4 QTL分析和EFS位点解析 1）QTL和上位互作分析 在Map Manager QTX version 0.30软件中进行标记回归分析，检测到了QTL之间的上位互作效应。双向方差分析（ a two-way ANOVA）计算得到他们的互作效应以及重要性。 2）EFS位点的定位将用到BC2F2，BC3F2和BC4F1群体。在140株S24杂合子植株中，通过标记辅助选择确定了mS1和mS2被用来定位EFS。 3 结果 S24基因在2008年由Kubo et al.在粳稻栽培稻中的一个籼稻染色体片段中发现。S24位点引起的花粉不育归因于在杂合子中携带S24-j（japonica allele for S24)基因的雄配子选择性败育，导致了在S24位点的严重分离变相有利于分离后代群体中得籼稻等位基因（Kubo et al. 2008）。 上面讲到的花粉不育主要是因为在S24位点的等位基因的相互作用。如果等位基因间的相互作用足以引起花粉不育的表型，那么同样的表型应该可以在任何遗传背景下都可以被看到？ 3.1 S24基因的不育性依靠其遗传背景 3.1 S24基因的不育性依靠其遗传背景 为此，我们培育了S24的两个近等位基因系，结果如下： 粳稻遗传背景下的近等位基因系： AI-NIL- F1 表现为花粉半不育（41.8﹪的花粉可育） (Figure 1)。 AI-NIL- F2 表现为严重的分离变相，jp/jp基因型比例为4.2％，表明在后代中优先传递籼稻S24-i等位基因(Table 1)。 籼稻遗传背景下的金等位基因系： IA-NIL- F1表现为92.9％的花粉可育性(Figure 1)。 IA-NIL- F2中，基因型比例jp/jp:in/jp:in/in=23:21:25 ，jp/jp基因型比例为33.3％，即使他们的分离比也偏离了1:2:1。 这些结果证明了，在籼稻遗传背景中，S24杂合体的S24-j雄配子是可育的，且能正常传递给后代。因此，我们能说，S24杂合基因仅仅在粳稻遗传背景下才能导致雄性不育，这样的