食品理化检验 PPT.ppt

实验十七 薄层层析法测定果酱中 苯甲酸、山梨酸的含量 苯甲酸标准液（2mg/mL）：精密称取0.2000g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中定容。 山梨酸标准液（2mg/mL）：精密称取0.2000g山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中定容。 三、仪器 玻璃板（10×18cm） 微量注射器（10uL,20uL） 层析缸 喷雾器 吹风机 四、测定操作 1、样品处理 称取25g混合均匀的样品，置于100mL分液漏斗中加0.5mL HCl酸化，用15、10mL乙醚提取两次，每次振摇1分钟，静置分层后将醚层分出，合并乙醚提取液。 实验十七 薄层层析法测定果酱中 苯甲酸、山梨酸的含量 用3mL 4% NaCl酸性溶液洗涤两次，弃去水层，静置15分钟，再分离出水层，将乙醚提取液通过无水硫酸钠移入25mL容量瓶中，加乙醚定容。吸取10.00mL乙醚提取液分两次置于10ml具塞离心管中，在约40℃水浴上挥干，加入0.1mL乙醇溶解残渣，备用。 2、聚酰胺薄层板的制备 称取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加约15mL水，研磨3分钟，在10×20cm玻璃板上使其均匀即涂成0.25-0.30mm厚的薄层，室温下干燥1小时，置于烘箱内80℃干燥1小时，取出后置干燥器中备用。 3、点样 实验十七 薄层层析法测定果酱中 苯甲酸、山梨酸的含量 在距薄层板下端2cm的基线上，用微量注射器点1uL、2uL样品液，同时分别点1uL、2uL苯甲酸、山梨酸标准溶液，点间距1.5cm。 4、展开显色 将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂的展开槽中，展开槽内壁贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10cm,取出挥干，喷显色剂，斑点黄色，背景蓝色。 5、定性与定量 把样品斑点与标准斑点比较，若与标准斑点同一位置线上出现样品斑点，说明样液中存在苯甲酸或山梨酸。然后根据斑点的面积大小及颜色深浅确定样品点的苯甲酸、山梨酸的含量，再进行计算。 实验十七 薄层层析法测定果酱中 苯甲酸、山梨酸的含量 五、计算 A——点样用样液中苯甲酸（山梨酸）的含量mg M——称取的样品质量g V1——溶解残渣时加乙醇体积mL V2——点样的体积mL 实验十八 薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定 一、原理 样品中AFT B1经有机溶剂提取、净化、浓缩并经薄层色谱分离后，在波长365nm紫外光下产生荧光，根据其在薄层板上显示荧光的强度与标准品AFT B1最低检出量产生的荧光强度比较来测定样品中AFT B1的含量。 二、试剂 三氯甲烷（AR） 正己烷（AR 沸程30-60）或石油醚（沸程60-90） 甲醇（AR） 苯 （AR） 乙腈 （AR） 无水乙醚 （AR） 丙酮 （AR） （以上试剂应重蒸，并应经检验对薄层色谱测定无干扰） 苯-乙腈(98:2)混合溶液 甲醇-水（55:45）混合溶液 三氟乙酸（AR） 氯化钠 （AR） 无水硫酸钠（AR） 硅胶G （薄层色谱用） 实验十八 薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定 5%次氯酸钠溶液：称取100g漂白精，加入500mL水，搅匀。另将80g工业用碳酸钠（Na2CO3.10H2O）溶于500mL温水中，倒入上述溶液中，搅匀，澄清过滤后贮存于带橡皮塞的玻璃瓶中，用作消毒剂。 黄曲霉毒素B1标准贮备液：用百万分之一的微量分析天平精密称取1-1.2mgAFT B1标准品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀释至100mL，避光置于4℃冰箱中保存。使用前用紫外分光光度计测定其浓度，再用苯-乙腈混合溶液调整其浓度为10ug/mL。（在350nm测定AFT B1的苯-乙腈溶液的吸光度，其摩尔消光系数为19800，可根据朗伯-比尔定律求出其浓度）。 黄曲霉毒素B1标准应用液I（1ug/mL）：吸1.0mL10ug/mL的黄曲霉毒素B1标准贮备液于10mL容量瓶中，加苯-乙腈混合溶液定容。 实验十八 薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定 黄曲霉毒素B1标准应用液II（0.2ug/mL）：吸取1.0mL 1ug/mL的黄曲霉毒素B1标准应用液I于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合溶液定容。 黄曲霉毒素B1标准应用液III(0.04ug/mL)：吸取1.0mL 0.2ug/mL的黄曲霉毒素B1标准应用液II于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液定容。 三、主要仪器 玻璃板：5×20cm 涂布器 色谱展开槽（25×6×4cm） 紫外光灯：100-125W，带有波长365nm滤光