植物检疫程序PPT.pptVIP

第三章 植物检疫程序 ;学习目标;植物检疫程序即检验检疫机构在执行检疫过程采取的方式和步骤，包括：检疫许可，检疫申报，现场检验和实验室检测，检疫处理和出证放行。;?第一节 检疫许可;?2．引进的单位或个人应具备下述3方面的条件（1）必须事先向审批部门提出申请； （2）必须提供上级主管部门的证明，详细说明“待批物”的品名、品种、产地和引进的特殊需要和使用方式； （3）必须提供具有符合检疫要求的监督管理措施。;5．手续 （1） 领取单证：引进单位提供有关证明和说明材料后，领取许可申请表。 （2） 报请批准：填写后报检疫机关审批。 （3） 批准输入：表明批准的数量、检疫要求、进境口岸、许可证有效期等。;?6．重新办理许可： 三变一超 （1） 变更输入物品种或数量 （2） 变更输出国或地区 （3） 变更进境口岸 （4） 超过有效期;;;;第二节 检疫申报;;;第三节 现场检验 ;;2、主要方法;;过筛检验 对象：仓储害虫、菌核、菌瘿、虫瘿、病残体、杂草种子等。 筛子的选择：依据供检物品，选用不同孔形和孔径的套筛。 计算公式：病原物含量（%）=病粒或菌瘿、菌核重量/样品重量× 100害虫含量（头/千克）=害虫头数/样品重量;;3、现场抽样;第四节 实验室检测;比较内容;二、实验室检测的常用方法;（一）、比重检测;（二）、染色检验;原理：种子表面常附着真菌孢子，将一定量的样品放入容器内，加一定量的无菌水，充分振荡，可使病菌孢子洗涤下来，而后离心后，可沉淀，镜检沉淀物可确定其种类和数量。 检验对象：附着在种子表面的真菌孢子。 如：小麦的矮腥黑穗病菌、甜菜锈病菌 主要仪器和试剂：振荡器、离心机、显微镜、 0.1％吐温溶液等;称取样品;计数方法 1、血球计数板计数?显微镜下观察每小格的孢子数目，求平均数。?孢子数（个）/g种子=每小格平均孢子数× 4000000 ×洗涤液总体积/种子重量 2、用平均每视野孢子数推算：5个玻片共观察50个视野。;影响检验结果的因素： 种子表面的病菌孢子不一定能完全洗涤下来； 离心管内，悬浮液表面常形成一层极难沉降的孢子薄膜，管???上也可能黏附孢子； 将悬浮液滴于玻片时，由于孢子迅速沉淀，造成一些视野间孢子分布极不均匀； 操作不够严格，造成人为误差。;原理：种子携带的真菌，无论外表黏附的还是潜伏种子内的，在种子萌发阶段即可开始侵染，甚至有些在种子还未萌发时就可长出病菌。 主要仪器及试剂：吸水纸、沙土、冰箱、培养箱等。 主要包括：保湿培养检验、沙土萌芽和试管幼苗症状测定法等三种方法，其中保湿培养检验法是国内外最常用的一种方法。;吸水纸法;观察判断：菌落形态、菌丝体颜色、疏密程度、生长特点、繁殖结构类型（如分生孢子梗的形状、长度及排列方式；分生孢子的形态、大小、颜色等及其在分生孢子梗上的排布）;;;吸水纸检验 ?存在问题 ：许多重要种传真菌用该法不能长出；腐生菌的迅速生长干扰实验结果。;适用对象 潜伏于种子、苗木、繁殖材料及植物产品内的病原菌，包括真菌和细菌。 ????????? 常用培养基 病原真菌—马铃薯蔗糖琼脂培养基（PDA）； 病原细菌—牛肉浸膏蛋白胨培养基。 还有选择性培养基，可抑制其它菌类的生长或病原菌的鉴定。 检验依据 病原菌形态学、生物学、生理生化特性等。 此方法对专性寄生的真菌、病毒、植原体等不适合。;1、分离的方法;植物病原线虫的分离检验;;染色检验;分离检验：有漏斗分离法、过筛检验法、漂浮分离法等。 i. 漏斗分离法：分离可活动的线虫。也称改良贝尔曼漏斗法。 ii. 过筛检验法：分离可活动的病原线虫。 iii. 漂浮分离法：分离土壤中马铃薯金线虫（Globodera rostochiensis）和各种胞囊线虫（Heterodera）的胞囊。???原理：干燥的胞囊比重较轻，可从水中漂浮出来。???方法：漂浮器分离法；三角瓶分离法。;;过筛检验法;2、接种方法;（4）、喷雾接种 （5）、针刺接种：水稻细菌性条斑病 （6）、剪叶接种：水稻白叶枯 （7）、摩擦接种：“病毒可侵入，细胞不死亡” ;（六）、鉴别寄主检测;（七）、血清学检测;;;;DNM-9602G酶标分析仪;（八）、显微镜检测;;球状病毒粒子;;（九）、分子鉴定和计算机辅助鉴定;?分子生物学方法 1、聚合酶链反应技术（PCR技术）:是体外模拟DNA 复制过程的核酸扩增技术。 ?PCR扩增步骤：?????????????????预变性：92-94℃，5min?????????????????变性：92-94℃，0.5-1min?????????????????退火：50-65 ℃, 0.5-1min?????