第八章现代生物学技术在蛋白质工程中的应用 PPT课件.pptVIP

原理 PTT 的原理是通过蛋白质水平进行突变检测，整个过程包括把双链 DNA 的 PCR 产物转录成 RNA，进而由 RNA 翻译成蛋白质。这一组反应可以相继在已商品化的兔网织红细胞裂解液中进行。 五、蛋白质错误折叠循环扩增技术 蛋白质错误折叠循环扩增技术（protein misfolding cyclic amplification，PMCA）就是最新发明的在体外诱导朊蛋白（PrPc）产生错误折叠生成朊毒粒（PrPsc）的技术。是近几年来刚刚建立的朊毒粒（PrPsc）微量检测技术 。 PMCA 技术的原理与特点 PMCA 是一种在体外进行的人为加速朊毒粒错误折叠过程的技术。一个循环当中又包含两个阶段： 第一个阶段是让痕量的 PrPSc 和大量的 PrPc 共同培育，在外界条件下促使 PrPc 向 PrPsc 的转化，形成 PrPsc 聚合体； 第二阶段是用超声波对样品进行处理，以打碎第一阶段培育过程中形成的 PrPsc 聚合体，使 PrPsc “种子”的数量得到增加，从而使下一个循环扩增的效率进一步提高。 谢 谢！ * * 适配子(aptamer)即能与靶分子高特异性、高亲和力结合的寡核苷酸配基,是与蛋白质等非核酸靶分子相结合...的DNA和RNA的总称 * * 1.1生物标志物概念 生物标志物（Biomarker）这一概念首次出现于国家研究委员会（NRC）在1983年出版的红皮书《联邦政府风险评估》中。它是指可以标记系统、器官、组织、细胞及亚细胞结构或功能的改变或可能发生的改变的生化指标，具有非常广泛的用途。例如，在医学领域，生物标志物可用于疾病诊断（例如前列腺特异性抗原PSA可用于前列腺癌诊断）、判断疾病分期（例如恶性肿瘤的分期）或者用来评价新药或新疗法在目标人群中的安全性及有效性。 * * fluorescence-activated cell sorter, FACS 酵母表面展示技术的应用 蛋白质的定向进化：酵母表面展示系统用于蛋白质亲和力和稳定性的定向进化已有成功报道，最先被用于抗体的亲和力成熟。 活的口服疫苗：在细胞表面表达的蛋白质易于接近抗体，因此，可被免疫系统识别，即使很小的肽，当展示在细胞表面时，也具有免疫原性。因而可通过在酵母表面表达异质性的抗原蛋白来发展疫苗。 第四节 其他新蛋白质工程技术 目前新兴的蛋白质工程技术 原子力显微镜技术 蛋白质打靶技术 蛋白质分子印迹技术 蛋白质截短技术 蛋白质错误折叠循环扩增技术 一、原子力显微镜技术 原子力显微镜（atomic force microscope，AFM）由 G. Binnig 等于 1986 年发明，是扫描探针显微镜家族的主要成员，其横向分辨率为 2～3 nm，纵向分辨率为 0.5 nm。它可以在接近生理环境的大气或液体条件下成像，获得直观的三维表面信息，还可以对原子和分子进行纳米级操纵，因此在生物结构的研究中具有独特的优势。 原子力显微镜系统结构 1 原理 AFM 的基本原理是通过控制并检测样品—针尖间的相互作用力来分析研究样品的表面性质的。其工作原理如图所示。 2 应用 采用AFM 研究了白蛋白、血红蛋白、胰岛素及分子马达和噬菌调理素等吸附在不同固体界面上的行为。 用于蛋白单分子结构与功能研究。 AFM 可用于观察蛋白质的分子结构及其参与的生理活动等。如抗体结构、纤维蛋白聚合、胶原装配、抗原抗体识别等。 对一些生理过程，从形态学角度进行了证实。 3目前存在的问题 目前，利用 AFM 研究的蛋白种类还很少，能检测到的蛋白性质的参数数量也是十分有限，亟需进一步扩展 AFM 在蛋白研究中的应用范围，增强仪器应用的功能性。 由于 AFM 在机械设计上的限制，单分子高分辨拓扑结构的记录时间比大多数生物过程发生的时间相比长得多，提高扫描速度是对扫描器的设计工艺乃至材料科学的发展提出了巨大的挑战 现有 AFM 探针的设计具有明显的物理局限性，由于 AFM 分辨率和功能与探针性能的密切相关性，因而探针的改造工艺的提高也是亟待解决的关键问题 4解决的途径 受材料和制造工艺的水平的限制，将突破点更多地寄托于引入新的设计思想和测量理念，多种高新仪器与技术的联用可能是解决该问题最有希望的方案之一。这些技术包括单分子荧光共振能量转移技术 、激光光镊技术等。 二、 蛋白质打靶技术 蛋白质打靶是最近几年发展起来的一种研究蛋白质功能的新方法。由于其高度的特异性和可控性，正越来越广泛地应用于神经功能的研究中。 原理 它采用了一种被称为免疫外源凝集素的新工具：这是一种通过 DNA 重组技术而获得的 IgG的Fc 片段和目标受体胞外域的融合蛋白。这使其保持了天然的与配体结合的特异性和亲和力，正是通过这种结合而发挥影响受体功能的作用。 免疫