组型分析.pptVIP

一、实验目的 掌握染色体常规压片技术、中期染色体制作技术 掌握染色体组型分析的基本方法 二、实验原理 染色体组型又称核型，是指将某一生物或某一分类群体（亚种、种、属等）细胞的整套染色体，按其相对恒定的特征（数目、大小、形态——着丝粒位置、随体与次溢痕的数目、大小和位置）排列起来的图像。 核型模式图是指将一个染色体组的全部染色体逐个按其特征绘制下来，再按长短、形态等特征排列起来的图像。 秋水仙素可阻止纺垂体形成使细胞分裂停留在中期。 三、实验用品 仪器：显微镜、水浴锅 用品：毫米尺、剪刀、胶水、计算器、蚕豆或人类染色体放大照片 四、实验操作流程 实验步骤（I）——中期染色体制备 1、种子萌发 2、获取根尖 3、秋水仙素处理 4、固定与保存 5、解离 6、染色与压片 7、镜检 先低倍镜观察，选出符合染色体组型分析要求的细胞。再转到高倍镜观察。 细胞要求：有丝分裂中期，染色体分散良好，没有重叠，数目完整，随体和着丝点明显，没有断裂，着色鲜明，形态清晰，且各条染色体处于同一平面上。 实验步骤（II）——核型分析 1、染色体计数、编号 对放大照片上的染色体进行计数，要保证染色体数目完整，并对每条染色体进行初步编号，便于测量和记录。 2、染色体测量 用透明尺准确测量各条染色体的总长度和每条染色体两臂的长度（分别量到着丝点的中部）。随体的长度是否计入染色体长度，应注明。染色体弯曲可先用细线量取染色体相等的长度，再用尺量出细线的相应长度。 组型公式 染色体形态测量数据表 3、分类 根据着丝点的位置，确定染色体的形态类型，臂比是反映着丝点在染色体上的位置。 并将结果填写到相应的表格中。 染色体分类标准 4、剪贴与排列 剪下照片上的染色体，将各指数相同的染色体配为一对，配对好的染色体按照由大到小的顺序依次排列。 着丝粒类型相同，相对长度相近的分一组。 染色体排列时，着丝粒应在一条直线上（粘贴前，在绘图纸上画一条横线），并且短臂在上，长臂在下。等长的染色体，把短臂较长的染色体排在前面。随体染色体排在最前或最后，特殊染色体单独排列。 5、绘制染色体模式图 按剪贴排列的染色体组型图用座标纸绘制成核型模式图。 五、实验结果与分析 * * 植物染色体组型分析 材料：蚕豆（2n＝12） 洋葱（2n＝16） 大蒜（2n=16） 实验步骤（I）——中期染色体制备 实验步骤（II）——核型分析 种子萌发 获取根尖 解离 镜检 染色 压片 秋水仙素处理 固定与保存 水培法 砂培法 上午10:00～11:00 下午 4:00～ 5:00 剪下根尖，在0.02％的秋水仙素溶液中处理3～4h 将细胞分裂阻止在中期 固定液： 乙醇:冰乙酸 = 3:1 70%的乙醇可以长期保存材料 1M HCl 60℃ 水浴中解离 10min 解离前后用蒸馏水冲洗 （1）取分生组织1/3左右于载片上，并铺展开。 （2）在材料上滴一滴染色液，染色5min以上。 （3）盖上盖片。 （4）用滤纸覆盖盖片，压实。 大蒜染色体 （2n=16） 蚕豆染色体 2n=12 染色体计数、编号 染色体测量 染色体配对 剪贴与排列 绘模式图 长臂 短臂 臂比 ＝ 某染色体长度（mm）? 单倍染色体总长度 相对长度 ＝ ×100％ 某染色体照片长度（mm）? 放大倍数 绝对长度 ＝ ×100％ 合计 全长 短臂 长臂 备注 染色体类型 臂比 相对 长度 放大相片长度（mm） 染色 体序 号 t 端着丝粒染色体 7.0以上 st 近端着丝粒染色体 3.0~7.0 sm 近中着丝粒染色体 1.7~3.0 m 中着丝粒染色体 1.0~1.7 M 正中着丝粒染色体 1.0 缩写 臂比 臂比 随体染色体（sat）用*标出