任务四：无菌操作技术.pptVIP

园艺植物快繁与脱毒技术   能力目标：能进行无菌操作技术各环节的准备、操作及操作后的整理工作。 知识目标：懂得无菌操作的基本内涵与 设备灭菌方法。 情感目标：培养学生认真、自信有责任感。 八项任务 理念：任务驱动、情境教学 方法：听、看、做、反复模拟、熟练操作 组培苗展示 无菌操作技术任务分解 （二）消毒与灭菌技术  1.物理方法 2.化学方法： 适用外植体、实验器皿、操作表面、皮肤等。 （1）35%甲醛水溶液 （2）0.1%升汞 （3）5%苯酚 （4）0.1%高锰酸钾 （5）75%乙醇 （6）0.25%新洁尔灭 （7）漂白粉上清液 （三）无菌室空气污染情况检验 （1）平板检验法： 接种室使用前0.5 h或1 h，将盛有常规培养基平板的培养皿打开，不同时间段盖好培养皿。以不打开的培养皿作为对照皿。供试培养皿与对照培养皿一起放入30度的温箱中培养48 h，检查有无菌落,从形态判断杂菌种类。一般要求开盖5min的培养皿中菌落不超过3个 （2）斜面检验法： 将常用的琼脂斜面培养基各取两管放入接种室，按无菌操作将其中一管的棉塞取出，经过一定时间后，再将棉塞通过火焰，塞回试管，连同对照一起培养。经48h后，检验有无杂菌生长。 以开塞30min的斜面培养基不出现菌落合格。 1.点酒精灯 2.分割材料 3.灼烧瓶口 4.打开瓶盖 5.灼烧镊子 6.晾凉镊子 7.接种材料 8.烧盖瓶盖 1.教师演示 新任务引导 调查：植物宝宝有前景吗？ 思索：如何走好创业第一步? 细心细心再细心 认真认真再认真 谢 园林食品加工系 余慧琳 无菌操作技术 学习情境 剖析技能点 二 分解知识点 一 演示与操作 三 回顾与总结 四 消 毒：杀死、消除抑制 部分 微生物， 使之不发生作用。 灭 菌：用理化方法杀死物体表面和孔隙内 一切 微生物或生物体。 （一）灭菌与消毒 分解知识点 一 （1）干热灭菌 （2）湿热灭菌 （3）过滤灭菌 （4）射线灭菌 （5）火焰灼烧灭菌 检验无菌室空气污染情况，对改进灭菌措 施、提高成品率是非常必要的。 在接种操作开始时，按程序打开盛有常规 培养基的培养皿盖子或试管塞，经5min、30min 或直到工作结束时再盖好，以检验在不同的使 用时间内空气污染的程度。 观看实训录像，同步模拟接种程序和部分无菌操作规程。 剖析技能点（无菌操作技术） 二 八 项 准 备 八 项 操 作 八 项 整 理 无 菌 操 作 技 术 八项准备 ◆接种室灭菌 ◆培养室灭菌 1.房间准备 臭氧灭菌机：1-2h。 紫外灯照射：距离小于1.2m，20-30min 房间准备方法 接种台喷雾消毒：70%酒精,0.2%新洁尔灭。 熏蒸灭菌：5-8ml/m3甲醛+5g/m3 高锰酸钾；冰醋酸加热。 用前干热灭菌：160-180℃,1.5-2.0h 用前湿热灭菌：121℃, 20-30min 接种前灼烧灭菌：用酒精棉球擦试，或浸入95%酒精液中，并拿出灼烧。 八项准备 2.金属用具准备 干热灭菌：160-180℃,1.5-2.0h 湿热灭菌：121℃, 20-40min 灼烧灭菌：接种前用酒精棉球擦试消毒，并在 酒精灯火焰上灼烧。 八项准备 3.玻璃器皿准备 ◆湿热灭菌：121℃,20-30min，实验服灭菌后置于缓冲间或密封好。 八项准备 4.工作服、口罩、帽子等布制品准备 灭菌方式：喷雾、涂抹杀菌 应用：桌面、墙面、双手、材料表面 消毒剂：70%酒精；1-2%来苏水；0.25-1%新洁尔灭 八项准备 5.接种台准备 剪指甲、洗手 八项准备 6.个人卫生准备 八项操作 接种方法 盖酒 精灯 关超 净台 工具 清理 酒精 回收 清理 废物 擦拭 台面 接种瓶 贴标签 放入 培养室 八项整理 D关紫外灯，开日光灯及风机，擦双手及台面 E擦拭接种工具并反复灼烧，烘烤培养皿 G接种完，清理台面并标识 B接种前20min打开紫外灯 C接种员洗手，在缓冲间换鞋、穿好实验服 A接种前4h接种室灭菌　 无菌操作流程 F分割材料，进入接种环节 2.学生操作 演示与操作 三 分割 材料 灼烧 瓶口 打开 瓶盖 灼烧 镊子 晾凉 镊子 接种 材料 烧盖 瓶盖 点酒 精灯 八项准备 八项整理 八项操作 1.房间准备 2.金属用具 3.玻璃器皿的 准备 4.工作服、口 罩、帽子等 布制品准备 5.接种台准备 6.个人卫生 7.外植体准备 8.培养基准备 （提前进行） 　 1.点燃酒精 2.分割材料 3.灼烧瓶口 4.打开瓶盖