螺旋藻对六种抗生素的敏感性研究.pdfVIP

高技术通讯 2001.7 螺旋藻对六种抗生素的敏感性研究① 王高歌② 威晓南 张宝红 张学成③ (青岛海洋大学海洋生命学院 青岛266003) 摘 要 通过6种差因工程中常用抗生素对螺旋藻生长抑制的研究发现，钝顶螺旋藻氏 和极大螺旋藻SM对卡那霉素和新葬素不敏感，10--700pg/ml的卡那霉素和10-300pg/ ml新霉素仍不能抑制其生长;凡和SM对庆大霉素的敏感性存在较大差异，液体培养中 的抑制浓度分别是300pg/ml和50pg/ml;凡和SM品系对氨节青霉素和链霉素较敏感， 固体培养中5.0-50.Opg/ml的氨节青霉素对它们有致死作用;液体培养中链霉素的抑 制浓度是5.Opg/ml，固体培养中链霉素的致死浓度是50pg/ml;氏和SM对氛霉素最敏 感，液体培养时0.1pg/ml的氧霉素可抑制螺旋藻的生长，固体平板致死浓度是1.Opg/ ml。应用电转化法将带有CAT基因片段的同源重组质粒导入螺旋藻细胞，用含有20pg/ ml氯霉素Zarrouk固体平板筛选出了抗性转化子，研究结果表明，氛霉素是螺旋藻转化系 统中理想的抗性选择试剂。 关健词 螺旋藻，抗生素，敏感性，选择标记 的蓝藻。但是到 目前为止，在螺旋藻中没有分离出 0 引言 质粒和病毒，也没有建立起可靠的基因转移系 基因工程中选择标记的作用是在选择压力下使 统 〔“‘〕，这种情况阻碍了通过生物技术改良品种的进 未转化细胞不能生长、发育，而转化细胞由于选择标 程。建立有效的螺旋藻转基因表达系统，不仅可以 记基因产物对选择剂产生抗性，不受选择剂的影响， 获得优良的用于生产的藻种，而且还可以以螺旋藻 能正常生长、发育、分化，从而把转化体选择出 为高效的生物反应器，大量生产高价值的产品，如转 来￡1;。目前对高等植物遗传转化中选择标记的研 基因药物等，具有广阔的应用前景 究已比较成熟，卡那霉素(Kanamycin,Km),(A18, 可靠的选择剂是建立转化系统、表达外源基因 氯霉素 (Chloramphenicol,Cm)、潮霉素 (Hy- 的一个前提条件。抗性选择标记基因无论是抗生素 gromycin,hyg)和链霉素(Streptomycin,Sir)等是比 的还是除抗草剂的，都必须能与目的基因同步转化 较常用的抗生素选择剂[2-al。大型藻类常以氯霉 和在受体细胞中表达，这样容易选择出抗性转化体 素作为选择标记[5]。Bazinbl首先报道了抗链霉素 Cheevadhanarak等[is」和Kawata等U0}在研究螺旋 和抗多粘菌素B(polymixinB)性状在聚球藻(Syne- 藻的转化时都用 Cm 为选择试剂，曹吉祥等 chococcussp.)中的遗传转移现象，进行了蓝藻的遗 (1999)-曾报道螺旋藻对Cm和一种除草剂(L 传转化的研究。目前氯霉素[71氨节青霉素(Ampi- phosphinothricin,PPT)敏感。本文研究了一个钝顶螺 cillin,Amp)}l、链霉素191、红霉素 (erythromycin, 旋藻(秘ruling殉ten.sis)凡品系和一个极大螺旋藻 Ern):9」和新霉素(Neomycin,Nm)[7〕已被广泛地应 (Spirulinaniariune)SM品系对 (m,Amp,Sfr,Km、庆 用到单细胞蓝藻如聚球藻、集胞藻(Synechocystis 大霉素(Gentamycin)Gm和Vm等6种杭生素(表1) sp)和丝状蓝藻鱼腥藻(Anabeanasp.)的遗传转化 的敏感性，为螺旋藻的遗传转化做准备 中。 1 材料与方法 螺旋藻(Spirulinasp.)因为富含蛋白质、维生 素、不饱和脂肪酸、多糖和矿物质，具有全面的营养 1.1 材料 和多种医疗功能，是一种有巨大生物技术应用潜力 (1)无菌钝顶螺旋藻S6,S6-4(只作为螺旋藻电 ① 863计划资助项目(819-04-10)