血PP65抗原检测在诊断巨细胞病毒感染上的应用.docVIP

精品论文 参考文献 血PP65抗原检测在诊断巨细胞病毒感染上的应用 许增华1 杨文萍1 许东华2(通讯作者) （1江西省儿童医院消化科 330006；2江西省上饶市第二人民医院肝病科 334100） 【摘要】 目的 探讨血PP65抗原、尿CMV-DNA和血IgM抗体检测对婴儿巨细胞病毒（CMV）活动性感染的诊断价值。方法 通过免疫荧光技术对142例CMV病毒性感染患儿进行血PP65抗原检测，同时用实时荧光定量PCR方法测定尿CMV-DNA，并用ELISA法检测血清CMV-IgM，比较三种方法的检测结果；对25例PP65阳性患儿进行短期随访，分析PP65的临床应用价值。结果 142例CMV感染患儿中，PP65抗原阳性率89.4%(127/142)，阳性细胞范围7-145/2times;105个多形核白细胞。PP65与尿CMV-DNA两种方法检测的结果差异无统计学意义（chi;2=0.125，Pgt;0.05），但PP65与血CMV-IgM检测结果差异有统计学意义（chi;2=53.16，Plt;0.01）。PP65抗原和尿PCR的阳性符合率98.4%（127/129），阴性符合率86.7%（13/15），与IgM抗体阳性符合率是51.2%（65/127），阴性符合率19.5%（15/77）。PP65相对于PCR的敏感性为98.4%（127/129），特异性为97.6%（124/127）；PP65抗原水平与CMV感染的病情程度有明显相关性，高水平PP65感染患儿多发全身性感染，低水平PP65抗原血症多为单脏器感染（chi;2=49.03，Plt;0.005）。在感染恢复期，PP65转为阴性或明显下降。结论　PP65抗原检测是诊断活动性CMV感染的快速、敏感、特异的有效方法，量化结果有助于监测病情，评价感染状态。 【关键词】 巨细胞病毒 PP65抗原 荧光定量PCR IgM抗体 人巨细胞病毒（CMV）在人群中感染非常普遍，是小婴儿及免疫功能低下者较常见和严重的病原体之一。在感染早期进行特异性的抗病毒治疗能够有效提高治愈率，减少并发症及死亡率。大多数情况下CMV在临床上呈不显性或潜伏性感染，病毒可持续存在或终生在机体某些组织或器官中潜伏，此时病毒与机体处于相对平衡状态，一旦平衡被破坏，则可导致病毒复制被激活，病毒由不显性或潜伏感染转为显性或活动性感染。因此，如何早期、特异地检测ＨCMV感染，已成为诊断活动性ＨCMV感染、早期抗病毒治疗的关键。本研究通过荧光免疫组化法技术对巨细胞病毒感染的患儿进行血pp65抗原血症测定，并同时与尿定量CMV-DNA及血CMV-IgM作为对照，报报道如下。 1、资料与方法 1.1 一般资料 选择2010年10月-2012年10月在我院收治、确诊为CMV感染的142例患儿。年龄为3天-3岁，男88例，女54例；1岁以内婴儿110例，1岁以上儿童32例。其中86例单脏器感染患儿中，CMV性肝炎65例，CMV性肺炎14例，神力损害4例，血小板减少性紫癜3例。56例多脏器感染患儿中，合并肝功能损害43例，合并肺炎26例，合并听力损害19例，合并血小板减少性紫癜6例。所有患儿在检测前均未接受抗CMV治疗。 1.2 诊断标准 参照1989年宜昌会议制订的《巨细胞病毒感染诊断方案》［1］，诊断依据为：（1）出现与CMV感染相关的症状、体征并排除其他病因。（2）下列实验室检查中出现1种或1种以上阳性结果：血CMV-IgM阳性、血PP65阳性、尿CMV-DNA阳性（需同时有CMV感染的临床症状）。（3）将CMV感染患儿分成2组：单脏器感染组：CMV损害主要集中于患儿的某一器官或系统而无其他系统损害，如表现为肝肿大、黄疸、转氨酶升高或胸片间质性肺炎表现；全身性感染组：CMV损害患儿2个或2个以上器官、系统，临床诊断为巨细胞包涵体病。 1.3 方法 1.3.1 CMV-PP65抗原检测　应用荧光免疫组化法，用CMV-PP65抗原血症免疫荧光检测试剂盒检测人外周血多形核白细胞中的PP65抗原。抽取患儿外周静脉血3.0ml，2%EDTA-K2抗凝，用溶血素溶解血中红细胞，取2times;105个细胞制片、固定和破膜，与高特异性鼠抗CMV-PP65抗原单克隆抗体混合物（C10/C11）作用后，用FITC标记的羊抗鼠IgG单克隆抗体染色，在荧光显微镜下观察结果。检测试剂盒为CMV Brite（荷兰IQ公司），CMV-PP65阳性细胞的核呈均匀的苹果绿，以2times;105个多形核白细胞中PP65抗原阳性细胞ge;5个判为阳性（ge;5/2times;105个多形核白细胞），阳性及阴