血氨检验方法以及临床意义.docVIP

精品论文 参考文献 血氨检验方法以及临床意义 刘北航 (黑龙江省宝清县八五二农场疾病控制中心 155620) 关键词：血氨检验 临床意义 方法 人体内血氨含量极微，血氨的来源增加和去路减少，都会引起血氨增高。由于氨对人体有毒，能影响神经细胞的新陈代谢，故血氨测定对肝性脑病的诊断和鉴别诊断有极其重要的意义。 (一)原理 血浆氨的酶法测定基于下列反应： alpha;-酮戊二酸+NH4++NADPH L-谷氨酸+NADP++H2O 在过量alpha;-酮戊二酸、NAD(P)H和足量谷氨酸脱氢酶(GLDH)条件下，酶促反应的速率，即NAD(P)H转变成 NAD(P)+使340 nm吸光度的下降速率与反应体系中氨的浓度呈正比关系。 (二)标本采集 氨测定的准确性在很大程度上取决于标本的留取和收集。为了准确测定血氨浓度，必须注意以下几点： 1．吸烟是血氨浓度假性增高的主要原因。采血前1天的午夜后应禁止吸烟。严重吸烟的患者，采血前应淋浴，穿新的睡衣裤。采血医务人员也必须是非抽烟者。 2．实验室周围环境和实验室空气中的氨是标本氨污染的原因。为了减小标本和器皿受实验室空气中氨的污染，最好在特定实验室中采集标本和进行测定，并限制人员进出实验室，器皿必须经过化学处理。 3．血氨测定应用血浆进行测定，可选用草酸钾、EDTA或肝素抗凝剂，不能使用肝素铵抗凝剂，氟化物抗凝剂将使测定值增高。 4．标本采集后必须立即置冰浴中，尽快离心分离出血浆，并及时进行测定。即使在0℃，从采血到测定开始时间，滞留15分钟以上就可引起血氨浓度升高。另外，标本中含氮物质的分解代谢是氨污染的另一原因。采集后，血液中氨基酸即可发生脱氨分解，可造成血氨浓度升高。 5．尿氨也可以测定。尿应在无防腐剂条件下收集，并尽快测定。 (三)试剂 全部试剂必须用去稀氨溶液制备。去稀氨溶液用蒸馏水经氢型阳离子交换树脂处理获得。 1．66．7 mmol／L KH2PO4溶液：取9．12 g KH2PO4溶入去稀氨溶液中，定溶到1 L，4℃保存。 2．66．7 mmol／L Na2HPO4溶液：取9．51 g Na2HPO4溶解并加去稀氨溶液到1 L，4℃保存。 3．pH 8．0(plusmn;0．05)，66．7 mmol／L磷酸盐缓冲液(PB)：取5ml“1”液及95ml“2”液，混合，4℃保存，稳定3周。 4．310 mmol／L alpha;-酮戊二酸：取0．45 g alpha;-酮戊二酸，溶于5 ml去稀氨溶液中，用3 mol／L氢氧化钠调pH至接近5．0时，改用0．1 mol／L氢氧化钠调pH至6．8(plusmn;0．01)，切勿调得过碱，因高 pH可破坏alpha;-酮戊二酸，以去稀氨溶液稀释到10 ml，4℃稳定10天。 5．NADPH贮存液：称约10 mg NADPH(-20℃、干燥器保存)溶于1 ml PB中取出50mu;l，以PB稀释到5 ml为工作液，以PB调零，1 cm光径，在340 nm波长读NADPH工作液的吸光度，计算 NADPH贮存液中实际浓度： NADPH贮存液(mmol／L)=A340／6．22times;100 6．22为NADPH的毫摩尔吸光系数，据上式计算结果确定制备GLDH工作液中加入NADPH贮存液的量，使达到149 mu;mol／L。 需用NADPH贮存液(ml)=[149 mu;mol／Ltimes;需配GLDHml数(50)]／NADPH贮存液实际浓度(mmol／L)times;1 000。 7．GLDH工作液：根据GLDH酶制品(-20℃干燥器中保存)的比活，称出酶活力为992 U的相应量(如比活为50 U／mg蛋白，则称20 mg)，如GLDH在甘油中，可按U／ml吸出992 U的相应体积，置50 ml量瓶中，称入ADP(-20，干燥器中保存)15 mg，吸入计算量的NADPH贮存液，以PB稀释到50 ml，4℃保存可稳定7天。 8．氨标准贮存液(100 mmol／L)：称取(NH4)2SO4 660．7 mg，溶于去稀氨溶液定溶到100 ml，4℃保存。 9．氨标准应用液：用去稀氨溶液分别稀释贮存液成25、50、100及150 mu;mol／L。 (四)临床意义 正常情况下，氨在肝脏中转变为尿素。严重肝脏疾病时，