高糖诱导人肾小管上皮细胞凋亡的机制研究.pdfVIP

第30卷 第3期 青 海 医 学 院 学 报 V01．3O No．3 2009生 JOURNALOFQ~GHAIMEDICALCOLLEGE 20o9 ___ 】 Cj 同糖诱导人肾小管上皮细胞凋亡的机制研究 马玉香 白光辉 白雪源 李作祥 冯 哲 傅 博 (1．青海大学医学院；2．解放军总医院肾病科暨全军肾病研究所) 摘 要 目的 探讨高血糖对人 肾小管上皮细胞活性氧 (ROS)产生及凋亡的影响。方法 将 人近端肾小管上皮细胞 (HKC)分别 以不同时间在含有 5．5mMD(右旋)一葡萄糖 (正常糖对照 组)、25mMD一葡萄糖(高糖组)和20mML(左旋)一葡萄糖 +5．5mMD一葡萄糖 (渗透压对照 组)的DMEM培养基 中培养。’用化学发光法特异性检测细胞 内HO 水平。将细胞用荧光染料 CM—H，DCFDA标记后用激光共聚焦显微镜检测活细胞 中总 ROS水平。用荧光染料 Hoechst 33258对细胞染色后在荧光显微镜下计数细胞凋亡率。用AnnexinV—FITC／碘化丙锭双染后用流 式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。在高糖组中同时加入 30mM的抗氧化剂牛磺酸，观察其对细胞 凋亡的影响。结果 化学发光法检测和共聚焦显微镜检测显示高糖可明显促进肾小管上皮细胞 内 活性氧的产生，与其他两对照组比较有显著差异(P0．O1)；Hoechst33258染色法检测和流式细胞 仪检测分析显示高糖可明显诱导肾小管上皮细胞的凋亡发生，与其他两对照组比较有显著差异 (P 0．O1)；流式细胞仪检测分析显示抗氧化剂牛磺酸可明显抑制高糖诱导的肾小管细胞凋亡，与高 糖组比较有显著差异(P0．O1)。结论 高糖可通过促进细胞 内生成过量ROS而诱导肾小管细胞 凋亡发生，抗氧化剂可阻断高糖诱导的肾小管细胞凋亡。 关键词 高糖 肾小管 活性氧 凋亡 牛磺酸 中图分类号 Q493．8 Q735 文献标识码 A THE M ECHANISM oFAPoPT0SIS INDUCED BY HIGH GLUCoSE IN HUMAN RENAL TUBULAR EPITHELIAL CELLS MaYuxiang ，BaiGuanghui，BaiXueyuan。 LiZuoxiang ，FengZhe ，FuBo ， (1．QinghaiUniversityMedicalCollege； 2．ChinesePLAInstituteofNephrology，ChinesePLAGeneralHospita1) Abstract Objective ToinvestigatetheeffectofhighglucoseonROSproductionandapoptosisintherenal tubularepithelialcellsandtOelucidatethemolecularmechanism ofrenaltubuleapoptosisinducedbyhighglucose． MethodsHumanproximalrenaltubularcelllineHKCwasculturedinDMEM medium containing5．5mM D(Dex- trorotation)一glucose(normalglucosecontro1)，25mMD—glucose(highglucose)and5．5mMD—glucose+ 20mM L(Laevorotation)一glucose(osmoticpressurecontro1)fordifferenttime．Chemoluminescenceassaywas usedtodetectH。O，levelintracellularly．ROS(reactiveo