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第四章 药用植物资源 宋晓虹 植物化学成分的分离纯化方法 (一) 结晶与重结晶 利用不同温度可引起物质在溶剂中溶解度改变的性质来分离混合物中的成分。非结晶态的固体物质处理成结晶状态称为结晶；不纯的结晶进一步用结晶方法精制成较纯结晶的过程，称为重结晶。 (二) 色谱法(层析法) 利用混合物通过某一物质时，由于对混合物中各组分具有不同的吸附和溶解等性能，从而将各组分分开的方法。 理想结晶溶剂应具备的条件 （1）不与被提纯的有效成分发生化学反应。 （2）对被提纯成分的溶解度随温度不同有显著差异，热时溶解度大，冷时溶解度小。 （3）对杂质冷热溶解度都很大或很小（冷热都能溶的杂质，在降温时被提纯的物质析出结晶后，仍留在母液中；冷热都不溶的杂质，可趁热过滤以除去）。 （4）溶剂的沸点不宜过高或过低（过高时，附着于晶体表面的溶剂不易除去，过低时，溶解度冷热变化不大，不利于析出）。 （5）能给出较好的结晶。 （6）无毒或毒性较小。 有效成分纯度的判断 （1）结晶的形态和色泽。纯化合物应晶形一致，色泽均匀。 （2）熔点和熔距。纯化合物有固定的熔点和较小的熔距(1-2℃ )。 （3）层析分析。纯化合物在不同条件薄层层析时，应得到单一，近圆形斑点。必要时可通过高效液相色谱确定结晶的纯度。 层析法 定义：层析法又称色谱法，是一种使不同分子相互分离的过程，它利用物质在两相中吸附或分配系数的差异达到分离的目的。当两相作相对移动时，被测物质在两相之间进行反复多次的吸附或分配，这样使原来微小的吸附差异产生的很大的效果，达到分离、分析的目的。 层析法作为一种分离、分析方法，其最大的特点在于能将复杂的混合物分离为各个单一的成分，或分离为单一成分后，逐个加以检测。 层析法的发明历史 早在古代罗马时期，人们已知道将一滴含有混合色素的溶液滴在一块布或一片纸上，通过观察溶液展开产生的一个个同心圆环来分析染料。 现代色谱法从发明到现在已有近百年的历史。 层析法的发明历史 1901年，俄国植物学家茨维特（Tswett)开始研究色谱分离方法。1903年他发表了题为“一种新型吸附现象及其在生化分析上的应用”，提出了应用吸附原理分离植物色素，首先认识到了层析法在分离分析方面有重大价值。 1907年， Tswett第一次公开展示了采用 色谱法提纯的植物色素溶液以及色谱图- 显示着彩色光环的柱管。 层析法的原理（以吸附层析为例） 吸附剂对A、B两成分的吸附能力：AB 流动相对A、B的解吸能力AB A在吸附剂上运动速度慢 B在吸附剂上运动速度快 不同容器接收可分别得到A和B 层析法的分类 按层析原理不同：吸附层析；分配层析；排阻层析；离子交换层析 按操作形式不同：平面层析（薄层层析、纸层析）；柱层析 按流动相不同：液相色谱（液-固、液-液）；气相色谱（气-固、气-液） 吸附层析法的原理 利用吸附剂对混合物中各种成分吸附能力的差异，而使混合物中各成分得以分离的色谱方法。 吸附剂对被分离成分的吸附能力越强，被分离成分吸附得越牢固，在色谱中移动的速度就越慢，反之移动的越快。 所用的吸附剂和流动相固定时，吸附力的大小主要取决于被分离成分的性质，对于极性吸附剂，成分的极性越大，被吸附的越牢固，移动的速度越慢，根据成分移动速度的不同，把一系列极性不同的成分分开。 吸附层析的吸附剂 一、吸附剂的性质： 多孔性物质，具有较大的比表面积。 表面有许多吸附中心。 二、常用吸附剂：硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性碳等。 三、硅胶的性质：SiO2·xH2O，多孔性的硅氧环交连结构。 四、硅胶吸附原理：骨架表面的硅醇基，通过氢键与物质作用。样品与流动相分子竞争，占据吸附剂表面活性中心。 硅胶吸附层析中影响分离的因素 一、组分的极性（分子中所含官能团的种类和数目） 极性大易被吸附，移动速度慢。 化合物极性顺序：烷烃＜醚＜酯＜酮＜醛＜醇＜羧酸 二、流动相的选择：使被分离组分移动速度适中。 分离极性小的物质使用极性小的流动相。 分离极性大的物质使用极性大的流动相。 人参中人参皂苷的分离纯化 存在于五加科植物人参的主根、侧根及茎叶中。 根据6位碳上是否有羟基分为两类: 20(S)-原人参二醇衍生的皂苷、20(S)-原人参三醇衍生的皂苷。 20(S)-原人参二醇衍生的皂苷 薄层层析 定义：将固定相均匀地铺在玻璃板上，把要分离的样品点在薄层上，然后用合适的溶剂展开，从而达到分离和鉴定的目的。 比移值（Rf）的测定 表示某一化合物经过展开后在薄层板上的相对位置。 Rf = 原点到层析斑点中心距离 原点到溶剂前沿的距离 Rf值越大表示该化合物展开速度快，对于硅胶层析表示物质吸附弱。 物质不同，Rf值很有可