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第八章 酶制剂;第一节 概述;（二）酶的分类和基本特性 酶的分类 根据各种酶在代谢调节中的作用不同，可以将酶分为一下几种： （1）调节酶 ①变构酶：是与代谢调节有很大关系的一类酶。 ②同功酶：具有同一种酶的底物专一性，但分子结构不同的一类酶。 ③多功能酶：能够催化两种以上不同反应的酶。 （2）静态酶：通常与代谢调节关系不大。 （3）潜在酶：指酶原、非活性型或与抑制物结合的酶。 1961年，国际生物化学联合会酶学委员会按照酶催化的化学反应类型，把所有的酶分成了六大类，即氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、异构酶、连接酶。 ;2. 酶的特性及其影响因素 （1）底物浓度 （2）酶浓度 （3）温度 （4）pH （5）抑制剂及激活剂;二、酶制剂的应用;1. 通过酶活力变化进行疾病诊断;2. 用酶测定物质的量的变化进行疾病诊断;3. 酶在疾病治疗方面的应用;4. 酶在药物制造方面的应用;淀粉酶类与淀粉糖业;果汁生产与果胶酶;酶在轻工、化工方面的应用 ;生物抛光是一种用纤维素酶改善纤维素纤维制品表面的整理工艺,以达到持久的抗起毛起球并增加织物的光洁度和柔软度 ;酶制剂在国外饲料工业中得到不断应用，不仅提高了饲料原料的转化率，也促进了对饲料的消化。;酶水解了毛根部的毛囊蛋白而使毛松动脱落。蛋白酶分解皮纤维间质中的可溶性蛋白质，使皮纤维进一步松散软化。;酶在环境保护中的应用;酶在生物技术方面的应用; 现代基因工程的创始人P·伯格（美国,1926－）在1960年以敏锐的科学预见力提出一个大胆的设想：是否可以创造出一种人工方法，把外界的遗传基因引入动物体内，以达到改变遗传性状和治疗某些疾病的需要呢？1972年，伯格把两种病毒的DNA用同一种限制性内切酶切割后，再用DNA连接酶把这两种DNA分子连接起来，于是产生了一种新的重组DNA分子，首次实现两种不同生物的DNA体外连接，获得了第一批重组DNA分子，这标志着基因工程技术的诞生。伯格因此获得了1980年诺贝尔化学奖。 ;三、酶制剂的生产方法;2. 深层液体培养法;第二节 酶的发酵生产 ——α－淀粉酶生产工艺;为制造高活性的淀粉酶并便于贮运，可把发酵液用硫酸铵或有机沉淀剂沉淀制成粉状酶制剂，最好贮藏在25℃以下、较干燥避光的地方。 利用蛋白酶比淀粉酶的耐热性差的特点，将α－淀粉酶的发酵液加热处理可以使淀粉酶的储藏稳定性大为提高。在培养基中添加柠檬酸盐可抑制某些菌株产生的蛋白酶，用底物淀粉进行吸附也可将淀粉酶和蛋白酶进行分离。;（一）米曲霉固态法α-淀粉酶生产工艺;2. 发酵;2. 提取;（二）枯草杆菌BF-7658深层液体发酵α-淀粉酶生产工艺;1. 生产工艺;2. 发酵;3. 提取;第三节 酶的分离与纯化;一、酶的提取、分离纯化技术路线;酶的纯化过程，约可分为三个阶段： (1) 粗蛋白质 (crude protein): 采样 → 均质打破细胞 → 抽出全蛋白，多使用 盐析沉淀法；可以粗略去除蛋白质以外的物质。 (2) 部分纯化 (partially purified): 初步的纯化，使用各钟 柱层析法。 (3) 均质酶 (homogeneous): 目标酶的进一步精制纯化，可用制备式电泳 或 HPLC。;二、细胞破碎 许多酶存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。 1）机械破碎 2）物理破碎 3）化学破碎 4）酶解破碎;机械破碎;酶的提取是指在一定的条件下，用适当的溶剂或溶液处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂或溶液中的过程。也称为酶的抽提。 酶提取时首先应根据酶的结构和溶解性质，选择适当的溶剂。一般说来，极性物质易溶于极性溶剂中，非极性物质易溶于非极性的有机溶剂中，酸性物质易溶于碱性溶剂中，碱性物质易溶于酸性溶剂中。 酶都能溶解于水，通常可用水或稀酸、稀碱、稀盐溶液等进行提取，有些酶与脂质结合或含有较多的非极性基团，则可用有机溶剂提取。 ;酶的主要提取方法;四、 酶的分离方法;1.沉淀分离;在盐浓度达到某一界限后，酶的溶解度随盐浓度升高而降低，这称为盐析现象。 ;有机溶剂之所以能使酶沉淀析出。主要是由于有机溶剂的存在会使溶液的介电常数降低。例如，20℃时水的介电常数为80，而82％乙醇水溶液的介电常数为40。溶液的介电常数降低，就使溶质分子间的静电引力增大，互相吸引而易于凝集，同时，对于具有水膜的分子来说，有机溶剂与水互相作用，使溶质分子表面的水膜破坏，也使其溶解度降低而沉淀析出。 ;2.离心分离;3.过滤与膜分离;过滤的分类及其特性 (根据过滤介质截留的物质颗粒大小不同 ) ; 借助于一定孔径的高分子薄膜，将不同大小、不同形状和不同特性的物质颗粒或分子进行分离的技术称为膜分离技术。膜分离所使用的薄膜主要是由丙烯腈、醋酸纤维素、赛璐玢以及尼龙等高分