第四章海洋多糖PPT.ppt

第四章 海洋多糖polysaccharide ;糖概述;Saccharides (or Carbohydrates): 糖类; 碳水化合物;结构与保护作用：纤维素、几丁质、果胶 能量来源：葡萄糖、淀粉、糖原，ATP 复杂的生物学功能 —重要的生命物质 —影响蛋白质的折叠、溶解、半衰期、抗原性、 生物活性； —信息分子参与生命活动中的各种识别和信号转导； 糖类药物 (Carbohydrate Drugs) ;血型物质与血型决定簇;单糖 Monosaccharides;糖概述;单糖;开链结构式的表示——Fischer 投影式;甘油醛：;D-葡萄糖 D-Glucose;一些实验现象;环状结构及构型;环状结构的表示方式;Haworth式的书写规律;α-D-吡喃葡萄糖;糖苷glycoside;熊果苷 尿道消毒 皮肤增白剂;双 糖;糖概述;多 糖;多 糖 概 述;纤维素;支链淀粉;多糖的生物活性;多 糖;多糖的理化性质;多 糖;多糖的提取;稀碱水溶液提取法： 酸性多糖或分子量较大的多糖在热水中溶解度不大，所以常用5-15% NaOH或Na2CO3水溶液提取 **注意：用稀碱溶液提取时，温度必须保持在10℃以下，否则多糖容易发生降解反应。通常在冷却的条件下(4℃)，放置6-8小时，然后过滤或离心，滤液用稀盐酸调节pH至中性即得碱性多糖提取液。 ;酶解法： 在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取 粉碎的植物悬浮于水中, 调节至最适温度（通常是38-50℃）, 最适pH范围（通常是pH3.8-4.5）, 加入5-25%复合酶，反应4小时, 过滤去残渣, 滤液即为多糖提取液 其它方法： 超声波提取主要是利用超声波空化产生的极大压力造成被破碎物细胞壁及整个生物体破裂，而且整个破裂过程在瞬间完成；同时超声波产生的振动作用加强了胞内物质的释放、扩散及溶解，加速植物中的有效成分进入溶剂，使其进一步增大了有效成分的溶出。 微波提取靠微波电子管发出的电磁波，感应生电，又转化成分子的动能而发热，具有快速、高效、安全的特点；其次微波的频率很高，能透入物体的深度较深，对细胞的结构有较大作用。 ;;多糖的纯化;蛋白质除去通常采用方法： 1. 酶法：蛋白酶将提取液中的蛋白质酶解。常用链霉蛋白酶(pronase)，其方法是在pH7-8时，加入链霉蛋白酶，37℃消化2-4天，然后反应物于沸水中加热5分钟以阻断反应。 2. Sevage法：蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性 将氯仿按多糖水溶液1/5体积加入——加入氯仿体积1/5的正丁醇——剧烈振摇20分钟——离心，分去水层与溶剂层交界处的变性蛋白 特点：条件温和，缺点是效率不高，一般要重复5次左右 ;3. 三氟三氯乙烷法：等体积的三氟三氯乙烷加入到提取液中，在冷却的情况下搅拌10分钟，蛋白质成胶冻状，离心除去胶状蛋白质。上层水相再用上述溶剂处理2次，即得无蛋白质的多糖 特点：此法效率较高，但因溶剂沸点较低(b.p.56℃)，易挥发，且必须在低温条件下进行，不宜大量应用。 4. 三氯醋酸法：在冰浴中搅拌的情况下缓缓于提取液中加入15-30% 三氯醋酸，直至溶液不再继续混浊。在低温下（4℃）放置4小时。离心除去沉淀即得无蛋白质的多糖提取液 特点：由于三氯醋酸的酸性较强，往往会引起某些多糖的降解，所以操作必须在低温下进行，该法效率较高，常用于植物多糖的去蛋白 ;多糖的脱色;过氧化氢脱色法（氧化脱色） 1）将0.3-0.8%粗多糖水溶液用浓氨水调PH至8 2）50 ℃加入过氧化氢（比例为10-30%ml/g） 3）在 50 ℃下保持2小时 4）醋酸调节至PH7.0，减压浓缩 5）3倍量乙醇沉淀，即得脱色的多糖。 该法在多糖粗品的脱色中常用。但必须严格控制脱色条件，如温度、时间、PH等。尽管如此，该法也会引起一定多糖的降解损失。 ;多糖的分离;有机溶剂沉淀法： 原理：根据不同的多糖在低级醇或酮（通常是乙醇或丙酮）中具有不同溶解度而进行分离；分子量大的多糖较分子量小的多糖在乙醇（或丙酮）中的溶解度小 逐步加大乙醇（或丙酮）的浓度可将不同分子量的多糖分别沉淀出来 ;金属络合法： 原理：根据不同多糖能与各种铜、钡、钙和铅离子形成络合物而沉淀的性质进行多糖的纯化。 常用的络合剂有氯化铜、氢氧化钡和醋酸铅等;柱层析方法：;凝胶柱层析： 根据多糖分子的大小和形状的不同即按分子筛的原理进行分离的 常用的凝胶有葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶，展开剂为各种浓 度的盐溶液及缓冲液。 亲和色谱 用凝集素一般是蛋白质和糖蛋白作亲和色谱来分离多糖。;