疏水性elp基因设计与基因库构建.pdf

微生物学通报 Apr. 20, 2013, 40(4): 584−592 Microbiology China © 2013 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 疏水性 ELP 基因设计与基因库构建 1,2 2 2 2 2* 2* 林衡 李军明 张立超 葛高顺 许崇波 胡学军 (1. 大连大学 生命科学与技术学院 辽宁 大连 116622) (2. 大连大学 医学院 辽宁 大连 116622) 摘 要: 【目的】设计合成疏水性类弹性蛋白(Elastin-like polypeptide, ELP)基因, 建立 ELP 基因库。【方法】选择疏水性最强的异亮氨酸(Ile, I)(疏水参数: 4.5)取代ELP 五肽重 复序列单元(缬氨酸-脯氨酸-甘氨酸-客座氨基酸-甘氨酸, VPGXG) 中客座残基 X 。全基因 合成一段含编码(VPGIG)10 序列，上游含Dra Ⅲ酶切位点、下游含Bgl Ⅰ酶切位点的ELP 单元。将 Dra Ⅲ和 Bgl Ⅰ设计为一对同尾酶(Isocaudarner), 利用这对同尾酶定向克隆 (Recursive directional ligation, RDL)一系列不同拷贝数的ELP 基因。为鉴定基因库有效性, 随机选取库中 ELP[I]50 基因进行蛋白表达、纯化并测定其相变温度(Inverse temperature transition, T ) 。【结果】建立了ELP[I] (n=10 、20 、30 、40 、50 、60 、70 、80、90 、100、 t n 110、120)基因库。测定 ELP[I] 的 T 为 24.3 °C 。【结论】首次单独选用Ile(I)作为 ELP 50 t 蛋白质标签中客座残基氨基酸, 增加了 ELP 中疏水性氨基酸的含量, 为进一步筛选出表 达量高、Tt 低、分子量小的ELP 标签奠定基础。 关键词: 类弹性蛋白, 异亮氨酸, 同尾酶, 定向克隆 基金项目：国家自然科学基金项目(No.; 辽宁省教育厅高校科研计划项目(No. L2010015) *通讯作者：Tel: 86-411 : 许崇波 : xuchongbo@; 胡学军 : huxuejun@ 收稿日期：2012-10-23; 接受日期：2013-01-09 林衡等 : 疏水性 ELP 基因设计与基因库构建 585 Design and construction of hydrophobic ELP genes library LIN Heng1,2 LI Jun-Ming2 ZHANG Li-Chao2 GE Gao-Shun2 2* 2*