香菇子实体蛋白多糖LeⅢ的分离、纯化及其性质研究.pdfVIP

华中农业大学学报990224 华中农业大学学报 JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL logo.gif (2519 bytes) UNIVERSITY bytes) 1999年 第18卷 第2期 VOL.18 No.2 1999 香菇子实体蛋白多糖Le-Ⅲ的分离、纯化及其性质研究 杨　娟　吴谋成　张声华 　　摘　要　香菇子实体经热水提取，乙醇沉淀，脱蛋白，DEAE纤维素柱及纤维素凝 胶柱层析得到淡黄色纤维状疏松固体Le-Ⅲ。Le-Ⅲ经聚丙烯酰胺凝胶电泳和Sepharose CL-6B柱层析,证明为分子量分布均一的多糖-蛋白质复合物。Le-Ⅲ红外扫描有典型的多 糖吸收峰，气相色谱测单糖组成为阿拉伯糖 、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖，摩尔 比为0.31∶0.47 ∶1.00∶1.15∶8.92 　　关键词　香菇； 蛋白多糖； 分离； 纯化 　　中图法分类号：Q539； S646.12 STUDY ON ISOLATION,PURIFICATION AND CHARACTERISTICS OF POLYSACCHARIDE Le-Ⅲ FROM THE FRUITBODY OF Lentinus Edodes Yang Juan Wu Moucheng Zhang Shenghua 　　ABSTRACT . 　　KEY WORDS　 Lentinus edodes 　　香菇（Lentinus edodes）是一种著名的食、药兼用菌。近年来发现香菇具有调节机 ［1～3］ 体免疫力、抑制肿瘤生长、抗辐射、抗糖尿病等方面的作用 。现代药理学研究 认为与香菇内多糖物质有关。目前有关香菇多糖提取纯化、理化性质及生理活性方面 的研究比较活跃。但大多数研究都是针对除去游离及结合蛋白质后得到的单纯多糖进 行的，而关于多糖究竟是独自发挥作用还是与蛋白质结合后发挥作用尚不得而知。因 此本试验主要研究了香菇蛋白多糖的分离、纯化，并对其理化性质进行初步探讨，为 今后更深入研究香菇蛋白多糖的化学结构和生物活性等工作提供基础资料。 file:///F|/qk/hznydx/hzny99/hzny9902/990224.htm（第 1／6 页）2009-12-22 16:27:52 华中农业大学学报990224 1　材料与方法 1.1　材料 　　段木香菇由湖北远安县真菌研究所提供，干品。 1.2　香菇多糖的提取 、分离和纯化 　　烘干香菇粉碎后用石油醚脱脂，80%乙醇脱单糖及低聚糖，热水浸提多糖，乙醇 沉淀，干燥后得香菇多糖粗品Le。取Le经Savag法脱游离蛋白，20%H O 脱色，透析脱 2 2 盐，浓缩后取样上DEAE纤维素柱，然后依次用水、0.05mol/L、0.1mol/L、0.2 检测。取0.5 mol/L NaCl洗脱 的既含多糖又含蛋白的部分，透析脱盐，浓缩后进一步用 纤维素凝胶柱（武汉大学化学系自制）纯化，用水洗脱，检测方法同上。收集糖、蛋 白质高峰部分，冷冻干燥得到淡黄色纤维状疏松 固体Le-Ⅲ。 1. 3　纯度鉴定 　　1)聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳［4］ 。胶浓度为5%，电泳缓冲液为0.025mol/LpH9.0硼 砂-硼酸缓冲液，样品为3mg/ml，每管进样量为100μl，电压110V,每管电流约2mA,电泳 10h，分别用阿利新蓝对多糖、考马斯亮蓝R250对蛋白质染色。 部收集（20min/管）