实验十酶作用的一般性质.ppt

一、实验目的 加深对酶性质的认识。 了解酶的专一性、温度、pH对酶活性的影响及其检测方法，掌握其原理及检测方法 二、实验原理及操作 （一）、酶的专一性 1、原理 酶是一种生物催化剂，具有高度的专一性，即每一种酶只能使一种或一类物质发生化学化学反应。 以唾液淀粉酶及酵母蔗糖酶为例 淀粉、蔗糖没有还原性； 唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解； 蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性的葡萄糖和果糖，但不催化淀粉的水解； 用班氏试剂（Benedict）检查糖的还原性。 2、实验方法： 1）唾液制备：用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一口蒸馏水，1分钟后使其流入量筒。 酶专一性 1、原理 高温使酶变性→失活→反应速度下降。 低温降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。 2、方法 淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。 在不同的温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。 温度对酶活性的影响 A、取pH5.0, pH6.8, pH8.0磷酸-柠檬酸缓冲液中各取3 mL，分别加入三支试管中，随后于每个试管中添加1%淀粉溶液(含0.3%NaCl)2mL； B、各管加入唾液1mL。注意：唾液浓度根据实际进行稀释(10倍); 混匀后于37℃水浴保温。 B、每隔1min由第2管取出一滴混合液于白瓷板上，加1滴碘化钾-碘KI-I2液，检验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时，向所有管依次添加1滴KI-I2液。观察各管中的颜色现象，并进行分析。 酶专一性 * 实验十 酶作用的一般性质 现象 沸水浴2~3min 2 2 2 2 2 2 Benedict试剂(滴) 37℃恒温水浴10min 4 4 4 0 0 0 蔗糖酶（滴） 0 0 0 4 4 4 稀释唾液（滴） 4 0 0 4 0 0 蒸馏水（滴） 0 4 0 0 4 0 2%蔗糖（滴） 0 0 4 0 0 4 1%淀粉（滴） 6 5 4 3 2 1 管号 T Relative activity(%) 0 20 40 60 80 （二）、温度对酶活性的影响 最适T 现象 上述温度条件下保持10min，各取出溶液一滴于反应板，加1滴碘化钾-碘液 2min后，向上述各管加淀粉液1 mL 1%淀粉溶液（mL） 沸水 37℃ 冰水 温度 4 4 4 稀释唾液（滴） 3 2 1 管号 酶的活力受pH的影响。 淀粉酶的最适pH6.8。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Enzyme activity pH Salivary amylase （三）、pH对酶活性的影响 最适pH8 2、实验方法 现象 1 1 1 碘化钾-碘液（滴） 37℃水浴保温（每隔1min由第2管取出1滴于白瓷板上，加1小滴碘化钾-碘液。待第2管变为棕黄色止） 1 1 1 唾液(mL) 2 2 2 1%淀粉-NaCl液(mL) 3 3 3 缓冲溶液(mL) 3 (8.0) 2(6.8) 1 (5.0) 管号 三、结果与讨论 *