禺毛茛叶绿体SSR引物筛选.doc

JIU JIANG UNIVERSITY 毕 业 论 文 题 目 禺毛院 系 生命科学学院 专 业 生物科学 姓 名 班 级 指导教师 二零年月 摘 要 毛茛属(Ranunculus)共有2000种，我国有122种禺毛茛复合体(R. cantoniensis complex)是其中形态相近的复合分类群。该复合体及其近缘种具有进化历史的悠久性、生长习性上的多样性、倍性上的多倍性以及遗传变异的丰富性等特点。SSR (Simple Sequence Repeat)已经成为一种非常成熟的分子标记技术。本文利用8对R. macranthus叶绿体SSR引物，通过SSR-PCR和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，在禺毛茛中筛选出2对多态性高的SSR引物（RC2F/RC2和RRC7F/RC7R）。利用这2对引物对猫爪草和肉根毛茛叶绿体基因进行扩增，扩增产物有多态性，通过这种方法可以快速鉴定猫爪草和肉根毛茛。因此，这些多态性引物的获得，为今后禺毛茛以及毛茛属植物系统进化和种间关系的研究提供更多的资料。 【关键词】 禺毛茛；；Abstract Ranunculus have 2,000 species and about 122 species lie in China.R. cantoniensis complex (R. cantoniensis complex) is the composite group of taxa with similar morphology. The complex and its closely related species are featured by long evolutionary history, growth habits of the diversity, ploidy and polyploidy on the richness of genetic variation and others. SSR has become a very sophisticated molecular marker technology. In this paper, using eight pairs of R. macranthus chloroplast SSR primers found 2 highly polymorphic SSR primers (RC2F/RC2R and RC7F/RC7R) by SSR-PCR and denaturing polyacrylamide gel electrophoresis in R. cantoniensis. R. ternatus Thunb and R. polii Franch. ex Hemsl chloroplast genes were amplified using this two pairs of primers, PCR products had polymorphism. In this way, R.ternatus Thunb and R. polii Franch. ex Hemsl were identified quickly. The acquisition of these polymorphism primers will provide more information for phylogenetic evolution and this relation between species research of Ranunculus cantoniensis. [Key words] Ranunculus cantoniensis; SSR molecular marker; Polymorphism; Primers; Screening 目　　录 摘 要 I Abstract i 引　　言 1 1.1禺毛茛的简介 1 1.1.1禺毛茛形态学特征 1 1.1.2禺毛茛的药物成分和药用价值 1 1.2 SSR分子标记介绍及研究进展 1 1.3 PCR技术 2 1.4 琼脂糖凝胶电泳 2 1.5 研究背景及意义 3 2 研究材料与实验方法 4 2.1研究材料 4 2.2 实验仪器及试剂 5 2.2.1仪器 5 2.2.2 实验试剂 5 2.2.3主要试剂配制 5 2.3 实验方法 6 2.3.1 总DNA 的提取步骤 6 2.3.2 1%的琼脂糖凝胶电泳检测所提总DNA的纯度 7 2.