根癌农杆菌介导2-5A合成酶基因对本氏烟的遗传转化研究.docVIP

根癌农杆菌介导2-5A合成酶基因对本氏烟的遗传转化研究 摘 要：烟草病毒病害是严重影响烟草生产质量和数量的一大危害。而 2，5-寡腺苷酸合成酶（2-5AS）pBINplusA，转化根癌农杆菌，用叶盘法侵染本氏烟，使用卡那霉素（Kan）进行筛选培养，以期获得具有广普病毒抗性的转基因烟草。目前已得到具有Kan 抗性的愈伤组织并分化出不定芽。 关键词：2-5A合成酶基因，根癌农杆菌，本氏烟，载体构建， 转化 The Transformation of 2,5-oligoadenylate Synthetase Gene Mediated by Agrobacterium tumefaciens in N.benthamina Abstract :Tobacco virus disease is one of the disasters that influence the tobacco production quality and quantityseriously. 2,5-oligoadenylate synthetase (2-5AS) has important antivirus function. We utilize the well-constructed expression vector pBINplusA that has the2-5AS gene to transform the Abacterium tumefaciens, and transfect the N.benthamina with leaf dishes of law, then carry on the selection on the basis of the kanamycin (kan), in order to get the transgenic tobacco with wide general virus resisting. And now, we have got the Unorgnized with the resistence to kanamycin and it has already developed the adventitious bud. Key word：2，5-ohigoadenylate synthetase(2-5AS),A grobacterium tumefaciens. N. benthamina, constructed vector, transformation. 前 言 烟草病毒病是烟草生产中危害最大的病害，其发生遍及各烟区，它们不仅造成烟草产量的损失，而且使烟草品质严重下降，近年来田间经常出现的病毒粒子复合侵染现象，更加重了病毒病对烟株生长的危害，使病毒症状加重且表现复杂化。耕作制度的变迁，持续暖冬现象的发生和北方保护地蔬菜面积的不断扩大，造成了有利于病毒和其它毒介体越冬越夏的环境条件，使烟草病毒病有日趋严重之势。 自1988年以来，为提高我国烟草的抗病、抗虫和烟叶质量，我国开始开展转基因烟草研究。转基因烟草是通过植物基因工程技术将编码特殊性状的外源基因构建到植物表达载体上，通过生物、物理或化学等方法，导入到受体烟草细胞或组织中，然后由受体细胞或组织再生得到的烟草植株及其后代。当前，转基因烟草研究主要集中在以下领域：(1)改善烟草的抗病、抗虫、抗逆和抗除草剂等农艺性状；(2)提高烟草的品质，降低烟草的有害成分；(3)利用转基因烟草生产生物制品；(4)利用转基因烟草进行基因功能研究。 由于烟草具有操作容易、培养基配方简单、组织培养周期短和转化效率高等优点，所以其实进行转基因的模式植物之一。通过遗传工程选择抗病毒的品种是防治烟草病毒病的一个重要途径，对于减少农药，保护环境更有深远的意义。世界上的科技工作者对此方面进行深入研究，并且获取明显成果。 1957年,英国科学家Alick lsaacs和Lean Lindenmann利用鸡胚绒毛尿囊研究流感干扰现象时，发现一种能够干扰病毒繁殖的物质,称之为干扰素(interferon，IFN)。IFN是细胞和机体受到病毒感染，或者受核酸、细菌内毒素、促细胞分裂素等作用后，由受体细胞分泌的一种广谱抗病毒糖蛋白。它的产生和作用的发挥受细胞基因组的调控，其活性表现为重要的免疫调节功能，抑制病毒活性。干扰素的作用机制研究表明,它并非直接作为反式作用因子对其效应分子的基因组进行调控,而是借助受体介导的信号转导系统引发一系列特异的生化反应,直至达到调控效应分子的目的. 一般认为干扰素诱导细胞产生抗病毒作用主要是2-5A系统在发挥重要作用。2-5A系统主要由两种酶组成：2’,5’-寡腺苷酸合成酶