酶促法制备茶黄素工艺初步研究 毕业论文.docVIP

毕 业 论 文（设计） 题 目 酶促法制备茶黄素工艺初步研究 指导老师 专业班级 生物技术及应用0701 姓 名 学 号 2010 年 5 月 30 日 摘　要 研究利用绿茶鲜叶浆及梨汁为酶源，采用体外氧化中酶促法来制备茶黄素。方法：采摘新鲜茶叶，阴凉干燥处摊放12h，-18℃以下冰柜冷冻6h，组织捣碎机粉碎匀浆，添加新鲜梨汁，并柠檬酸调pH值至4.7；茶多酚40g，加入乙酸乙酯溶解。将上述两部分液体，迅速混匀，加入发酵罐中，温度25℃，pH值4.7，通入空气流量0.6L/min，高速搅拌，发酵60min。再进一步分离两相，制备得到茶黄素。结论：经过液相检测，本文酶促法制备茶黄素工艺可以制得茶黄素，茶黄素主要在乙酸乙酯相中，含量6.86%。 关键词：茶黄素； 茶多酚； 体外氧化； 酶源； 发酵 目 录 引言1材料…………………………………………………………………………………2 1.1实验料.1.2底物处理…………………………………………………………………………3 2.1.3发酵（酶促反应）………………………………………………………………3 2.1.4茶黄素萃取………………………………………………………………………3 2.1.5茶黄素纯化………………………………………………………………………4 2.2检测方法……………………………………………………………………………4 3结果与分析…………………………………………………………………………5 3.1检测结果…………………………………………………………………………5 3.1.1茶黄素对照品图谱…………………………………………………………5 3.1.2酶促发酵茶黄素浓度检测……………………………………………………5 4总结与讨论………………………………………………………………………6 参考文献 新鲜茶叶（1芽2-3叶，产于浙江杭州）；梨（购于华联超市）；茶多酚（浙江绍兴东灵保健食品有限公司提供，TP≥98%） 1.2实验试剂 柠檬酸，乙酸乙酯，冰醋酸：分析纯 食用乙醇 乙腈：色谱纯 蒸馏水：由纯水器Ultra pure plus制得 AB-8大孔吸附树脂 1.3实验仪器 组织捣碎机（878-B 上海正慧工贸有限公司） 电子天平（JY10001 上海华岩仪器公司） 分析天平（AR2140 上海力衡仪器仪表有限公司河南兄弟仪器设备有限公司---------------------------公式（2.1） 3结果与分析 3.1检测结果 3.1.1茶黄素的对照品图谱 按照2.2检测方法，分析检测茶黄素单体对照品，检测HPLC图谱图3.1所示： 图3.1　茶黄素4种单体对照品HPLC检测图谱 由图3.1不难发现，4种茶黄素单体对照品出峰时间依次为30.005、42.697、53.102、57.027min，详细的样品浓度与对应出峰积分面积如表3.1所示。 表3.1　茶黄素单体对照品进样浓度及对应峰面积 单体 保留时间 RT 峰面积area 进样浓度 mg/ml TF1 30.005 0.240 TF2A 42.697 0.325 TF2B 53.102 0.135 TFDG 57.027 0.460 3.1.2酶促发酵茶黄素浓度检测结果 将按照2.1操作方法制备茶黄素溶液冷冻干燥，获得茶黄素粉末样品按照2.2操作方法进行HPLC检测，检测茶黄素浓度含量如表3.2。 表3.2　酶促法制备所得茶黄素样品HPLC检测结果 样品 检测物质 保留时间 样品峰面积 对照品峰面积 对照品 浓度 样品浓度 茶黄素浓度 水相25% 洗脱 TF1 30.53 0.240 0.01233 0.0387 TF2A 43.21 0.325 0.01284 TF2B 53.58 67738 0.135 0.00854 TFDG 57.78 74028 0.460 0.00497 水相70% 洗脱 TF1 30.74 0.240 0.03871 0.0804 TF2A 43.64 0.325 0.01983 TF2B 54.17 0.135 0.01390 TFDG 58.50 0.460 0.00795 乙酸 乙酯相 TF1 30.38 0.240 0.05149 0.1372 TF2A 43.06 0.325 0.03887 TF2B 53.41 0.135 0.02634 TFDG 57.64