三食品中苏丹红染料的测定.docVIP

实验十、食品中苏丹红染料的测定 标准依据：GB/T19681-2005食品中苏丹红染料的测定（高效液相色谱法） 目的要求 学习食品中苏丹红染料测定的原理和方法。 二、实验原理 苏丹红色素是应用于油彩蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成的着色剂，非食用色素，长期食用具有致癌致畸作用。苏丹红色素一般不溶于水易溶于有机溶剂，待测样品经有机溶剂提取，经浓缩及氧化铝柱层析萃取净化，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。 三、仪器与试剂 （一）试剂 1、乙腈 色谱纯 2、丙酮 色谱纯、分析纯 3、甲酸 分析纯 4、乙醚 分析纯 5、正己烷 分析纯 6、无水硫酸钠 分析纯 7、层析柱管：1cm (内径)5cm (高)的注射器管。 8、层析用氧化铝（中性 100目~200目）：105℃干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL 水降活，均匀后密封，放置12h 后使用。 9、氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，经敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL 正己烷预淋洗，洗净柱杂质后，备用。 10、5%丙酮的正己烷溶液：吸取50mL 丙酮用正己烷定容至1L。 11、标准物质：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；纯度≥95%。 12、标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.0mg（按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。 （二）仪器 1、高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器） 2、分析天平：感量 0.1mg 3、旋转蒸发仪 4、均质机或匀浆机 5、粉碎机 6、离心机 7、0.45μm有机滤膜 四、实验步骤 样品制备：将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需粉碎磨细。 样品处理： 1、红辣椒粉等粉状样品 称取1g ~ 2 g（准确至0.001 g）样品于三角瓶中，加入10mL ~20mL 正己烷，超声处理5min，过滤，用10 mL 正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5 mL 以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。控制氧化铝表面吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂质的多少用10mL ~30mL 正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL 洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5mL，经0.45μm有机滤膜过滤后待测。 2、红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品 称取0.5g~2g（准确至0.001 g）样品于小烧杯中，加入约1mL ~ 10mL 正己烷溶解,难溶解的样品可于正己烷中加温溶解。然后按1中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm有机滤膜过滤后待测”操作。 3、辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品 称取10g ~ 20g (准确至0.01g)样品于离心管中，加10mL ~20mL水将其分散成糊状，含增稠剂的样品多加水，加入30mL 正己烷 ：丙酮 =3 ：1，匀浆5min ，3000 rpm离心10min，吸出正己烷层，于下层再加入20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次正己烷，加入无水硫酸钠5g脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并保持5分钟，用5mL 正己烷溶解残渣后，按1中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm有机滤膜过滤后待测”操作。 4、香肠等肉制品 称取粉碎样品10g ~ 20g (准确至0.01g)于三角瓶中，加入60mL 正己烷充分匀浆5min，滤出清夜，再以20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次滤液，，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸至5mL以下，按1中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm有机滤膜过滤后待测”操作。 （三）测定 色谱检测条件 （1）色谱柱：Zorbax SB-C18 3.5μm 4.6mm150mm（或相当型号色谱柱） （2）流动相： 溶剂A 0.1%甲酸的水溶液 ：乙腈 = 85 ：15 溶剂B 0.1%甲酸的乙腈溶液 ：丙酮 = 80 ：20 （3）梯度洗脱条件 流速（mL/min） 时间（min） 流动相 曲 线 A% B% 1.0 0 25 75 线性 1.0 10.0 25 75 线性 1.0 25.0 0 100 线性 1.0 32.0 0 100 线性 1.0 35.0 25 75 线性 1.0 40.0 25 75 线性 (4) 柱温：30℃ （5）检测