肿瘤坏死因子-α对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化影响研究.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，３１（１）：６１１ ? 肿瘤坏死因子对小鼠骨髓间充质干细胞 α 成骨分化影响研究 １，２ ２ １ 何琳琳 　兰　飞 　薛小平 （１西北工业大学生命科学院　西安　７１００７２） （２ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＧｅｏｒｇｉａ，Ａｕｇｕｓｔａ，Ｇｅｏｒｇｉａ，ＵＳＡ　３０９１２） 摘要　目的：探讨肿瘤坏死因子（ＴｕｍｏｒＮｅｃｒｏｓｉｓＦａｃｔｏｒａｌｐｈａ，ＴＮＦ）对小鼠骨髓间充质干细胞 α α （ＢｏｎｅＭａｒｒｏｗｄｅｒｉｖｅｄＭｅｓｅｎｃｈｙｍａｌＳｔｅｍＣｅｌｌｓ，ＢＭＭＳＣｓ）成骨分化的影响。方法：以在促成骨分 化培养基（Ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｍｅｄｉａ，ＯＳ）中培养的小鼠ＢＭＭＳＣｓ作为对照，用含有ＴＮＦ的ＯＳ处理小 α 鼠ＢＭＭＳＣｓ。第７天进行碱性磷酸酶染色，或培养第２１天进行茜素红染色和定量分析。第７天 时用一份细胞提取得到的ｍＲＮＡ通过实时定量ＲＴＰＣＲ测定Ｒｕｎｘ２和 Ｏｓｔｅｒｉｘ的ｍＲＮＡ表达，用 另一份细胞得到的细胞裂解液通过 ＳＤＳＰＡＧＥ来测定Ｒｕｎｘ２和 Ｏｓｔｅｒｉｘ的蛋白质表达。结果： ＴＮＦ抑制碱性磷酸酶活性；ＴＮＦ抑制矿化骨节的形成；ＴＮＦ抑制Ｒｕｎｘ２和 Ｏｓｔｅｒｉｘ的ｍＲＮＡ α α α 和蛋白质表达。结论：ＴＮＦ对小鼠ＢＭＭＳＣｓ成骨分化的抑制，可能部分是通过抑制成骨分化中 α 两个关键的转录因子Ｒｕｎｘ２和Ｏｓｔｅｒｉｘ的ｍＲＮＡ和蛋白质表达来实现的。 关键词　肿瘤坏死因子　骨髓间充质干细胞　成骨分化　Ｒｕｎｘ２　Ｏｓｔｅｒｉｘ α 中图分类号　Ｑ７８ 　　类风湿性关节炎（ＲｈｅｕｍａｔｏｉｄＡｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）是一种 疾病提供思路和实验依据。 ［１］ 以疼痛、肿胀和关节破坏为特点的自身免疫性疾病 。 １　材料与方法 其病因目前尚未明确，但已知道其发病进程与关节局 部的炎性细胞因子的增高有密切关系，如肿瘤坏死因 １．１　材　料 子（ＴｕｍｏｒＮｅｃｒｏｓｉｓＦａｃｔｏｒ ，ＴＮＦ）等。ＲＡ引起的 α α α １．１．１　试剂　ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＭｏｕｓｅＴＮＦ （＃４１０ＭＴ） α 关节破坏会导致骨质疏松，使得骨量减少、骨脆性增 购自Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓＩｎｃ．，Ｏｓｔｅｒｉｘ抗体 （＃ａｂ２２５５２）购自 加，骨折的风险性增高。ＴＮＦ是一类重要的导致骨 α ＡｂｃａｍＩｎｃ．；Ｒｕｎｘ２单克隆抗体（＃１３０３）购自ＭＢＬ 质疏松的炎症因子，主要作用于成骨细胞（ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ；ＩＲＤｙｅ８００ａｎｔｉｒａｂｂｉｔＩｇＧ（＃６１１１３２１２２） ＯＢ）和破骨细胞（ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ，ＯＣ）。目前对于ＴＮＦ刺