从基本免疫反应来看,过敏性鼻炎属抗体IgE介导的Ⅰ型变态.docVIP

从基本免疫反应来看，过敏性鼻炎属抗体IgE介导的Ⅰ型变态反应。当机体接触了过敏原以后，机体会产生一种抗体叫IgE，它会吸附在组织肥大细胞、嗜碱性粒细胞表面，机体即处于致敏状态。当人体再次接触同一过敏原时，这些过敏原就会和IgE相结合，引起肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放组胺、激肽、白细胞三烯、前列腺素、嗜酸细胞趋化因子、血小板活化因子、五羟色胺等生物活性介质，这些介质作用在相应的组织上就会引发过敏反应。 组胺是过敏性鼻炎的最重要的介质，其可使小血管扩张、血管通透性增加、外分泌活动加强，这是过敏性鼻炎患者鼻粘膜水肿、分泌物增多、鼻呼吸阻力增加的重要物质基础。激肽可引起周围血管扩张、血压下降、血管通透性增加和组织水肿。白细胞三烯可使鼻粘膜血流量增加，它可能是急性变态反应时组织中中性粒细胞和嗜酸性粒细胞浸润的重要介质。 前列腺素是花生四烯酸通过环加氧酶途径代谢的产物，有类似组胺的作用。这些介质通过它们各自在鼻粘膜血管壁、腺体和神经末梢上的受体，使小血管扩张，血管通透性增高，渗出增加，炎性细胞浸润（以嗜酸细胞为主），组织水肿，神经末梢兴奋性增强等。上述病理变化即可导致相应的临床症状和体征。 ELISA法检测白细胞介素-2 [方法学原理] 在微孔反应板上包被抗人IL-2单克隆抗体，待测标本和标准品中的IL-2会与抗人IL-2单克隆抗体结合，游离的成分被洗去，同时加人生物素化的抗人IL-2抗体和HRP标记的亲和素。生物素与亲和素特异结合，抗人IL-2抗体与结合在单克隆抗体上的人IL-2结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色剂，若反应孔中有11．-2，HRP会使无色的显色剂呈现蓝色，加终止液变黄色。在波长450nm处测吸光度，IL-2浓度与吸光度成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中的IL-2浓度。[标本准备] 静脉血2ml，不抗凝。 [检测步骤] 1．在微孔反应板相应孔中分别加入待测样本、不同浓度标准品IOOul，再加生物素化抗体工作液50gl。 2．振荡混匀，置20～25℃环境中温育120min。 3．将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。 4．除空白孔外，加入酶结合物工作液100u1。 5．振荡混匀，置20～25℃环境中温育30min。 6．将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。 7．每孔加人显色剂A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃环境中避光显色10min。 8．加入终止液50gl后，轻轻振荡混匀。用酶标仪（450nm波长）测定各孔吸光度，与标准曲线对照，求出IL-2值。 人γ干扰素（IFN-γ）酶联免疫（ELISA） γ干扰素（IFN-γ） 标本处理及要求 1．血清、血浆、脑脊液、腹腔液标本可直接测定； 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 3．采集后尽早进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 操作步骤 1.???????? 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第一孔和第二孔中先各取50μl弃掉；再各取50μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为100μg/L，50μg/L ，25μg/L，12.5μg/L，6.25μg/L）。 2.???????? 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.???????? 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.???????? 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用 5.???????? 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 6.???????? 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.???????? 温育：操作同3。 8.???????? 洗涤：操作同5。 9.???????? 显色