顶空-气相色谱法测定血液中乙醇含量方法的研究.docVIP

精品论文 参考文献 顶空-气相色谱法测定血液中乙醇含量方法的研究 佳木斯市疾病预防控制中心 154000 摘要：利用乙醇的挥发性，以叔丁醇为内标，用顶空-气相色谱火焰离子化检测器（FID），对血液中的乙醇含量进行分析，经与平行操作的乙醇对照品比较，以保留时间定性，用内标法、峰面积比进行定量。该方法在0.5-400mg/100ml浓度范围内线性良好，回收率在95%-105%之间，方法检出限为0.01mg/100ml。 关键词：顶空 气相色谱法 血液 乙醇 内标 乙醇是一种高效麻醉剂，研究表明，饮酒后由于乙醇的麻醉作用，人的中枢神经活动会变得迟钝，并延及运动神经和末梢神经，使手足活动迟缓，生理机能减退，视力、听力等感知能力降低[1]。近年来，酒后驾车和酒精中毒事件日益增多，人体中乙醇含量的测定是诊断和治疗酒精中毒性疾病及对酒后引发的交通事故和刑事案件分析裁定的重要依据。乙醇主要在胃吸收，约1 h-1.5 h可全部吸收[2]。因此，血液乙醇含量分析对临床治疗效果监测和交通部门执法都有重要意义。交通事故处理和临床治疗中常需快速、准确地检测血液中乙醇含量[3]。目前，血液中乙醇含量测定有化学法、色质联用法、生物传感器法和气相色谱法等，这些已有的方法在实际应用中操作复杂，耗时长，或者成本较高，导致检测应用的局限性。本研究建立一种无需样品前处理方法，对实验影响因素进行探讨和优化，确立了血液中乙醇含量快速测定的顶空气相色谱法。 1实验部分 1.1仪器与试剂 Agilent7890A气相色谱仪（配FID检测器），北京中兴DK-3001A型顶空进样器，精密移液器，色谱纯乙醇和叔丁醇。 1.2分析条件 1.2.1色谱条件 色谱柱：INNOWAX毛细柱 30mtimes;0.32mm 进样口温度：250℃ 柱温：60℃ 柱流量：3ml/min 检测器温度：250℃ 分流比：10：1 进样方式：顶空进样器进样 氢气流量：30ml/min 空气流量：400ml/min 尾吹气流量：30ml/min 载气：氮气 1.2.2顶空进样器条件 样品瓶温度：70℃ 阀箱温度：90℃ 管路温度：110℃ 1.3试剂制备 1.3.1乙醇标准溶液的配置 吸取5.02ml色谱纯乙醇至于200ml容量瓶中，添加重蒸馏水至刻度，混匀，得2000mg/100ml乙醇储备液。将储备液稀释分别得到浓度为20mg/100ml、40mg/100ml、80mg/100ml、160mg/100ml的乙醇标准使用液。 1.3.2内标物标准溶液的配置 吸取0.64ml色谱纯叔丁醇到1000ml容量瓶中，添加重蒸馏水至刻度，混匀，得50mg/100ml叔丁醇标准使用液。 1.4定性测定 通过乙醇和叔丁醇色谱峰的保留时间进行定性分析。 1.5定量测定 1.5.1标准曲线 取0.5ml乙醇各浓度标准使用液两份，分别加入顶空瓶内，各加入0.5ml叔丁醇标准溶液，瓶口覆盖硅橡胶垫，用密封钳加封铝帽，混匀，置顶空进样器加热15min待测[4]。 1.5.2 样品处理 取0.5ml待测全血两份，分别加入顶空瓶内，各加入0.5ml叔丁醇标准溶液，瓶口覆盖硅橡胶垫，用密封钳加封铝帽，混匀，置顶空进样器加热15min待测。 1.6计算 1.6.1校准曲线 用乙醇与叔丁醇峰面积之比对乙醇添加含量做校准曲线。 1.6.2定量 利用校准曲线计算样品中的乙醇含量X（mg/100ml）。 1.6.3相对相差 两份样品平行测定结果的相对相差计算： 相对相差（%）= 式中： X1、X2—为两份样品平行定量测定的结果； --两份样品检测结果的平均值。 2讨论 2.1仪器条件 柱流速：气相色谱存在着一个最佳载气流速。在流速小于最佳流速时，流速增加，峰变锐（柱效增加），大于最佳流速后，流速增加，峰变钝（柱效降低）。在柱温恒定时，载气流速增加保留时间缩