第二章 吸光光度法1.ppt

第2章 吸光光度法Spectrophotometry 概述 2.1 吸光光度法基本原理 2.2 光度计及其基本部件 2.3 显色反应及显色条件的选择 2.4 吸光度测量条件的选择 概述 吸光光度法 定义：吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，包括比色法、可见及紫外吸光光度法及红外光谱法等。我们重点讨论可见光区的吸光光度法。 许多物质本身具有明显的颜异色，如KMnO4溶液显紫色，CuSO4溶液显蓝色，有些溶液本身无色，但加入其他试剂后，具有明显的颜色， 如Fe3＋＋SCN－→［Fe﹙SCN］］2＋，具有红色。 比色法 colorimetry 比较有色溶液对溶液透过光的强度。 例如：CuSO4溶液透过蓝色光的强度 优点： 仪器简单，操作简便，适宜于大批试样的分析。灵敏度高，因为是在复合光-白光下进行测定，故某些显色反应不符合朗伯-比尔定律时，仍可用该法进行测定。 缺点： 准确度不高（特别是微量测定时），标准系列不能久存，需要在测定时临时配制。现已普遍使用分光光度计测量 分光光度法： 比较有色溶液对某一波长光的吸收。 例如：CuSO4溶液透对黄色光的吸收强度的比较 吸光光度法的特点 a 灵敏度高。常用于测定试样中质量分数为10-5~10-6M的微量组分，甚至可测定低至质量分数为10-6~10-8的痕量组分。 b 准确度较高。目视比色法的相对误差为5%~10%，吸光光度法为2%~5%。 c 应用广泛。几乎所有的无机离子和许多有机化合物都可以直接或间接地用目视比色法或吸光光度法进行测定。 d 仪器简单、操作简便、快速。 一、物质对光的选择性吸收和溶液颜色 1．复合光和单色光 （1）复合光：不同波长的单色光按一定的比例混合而成的光。 例如：白光 （可见光） λmax =400～760nm 一束白光通过棱镜色散可得： 紫外 ︳ 紫 ︳ 蓝 ︳青 ︳ 绿 ︳黄 ︳橙 ︳ 红 ︳ 红外 400 450 480 500 560 600 650 750 800 （nm） （2）单色光：只有一种波长的光。 （3）互补光：适当波长（颜色）的单色光按一定强度比例混合→白光。 互补光，对应的颜色→互补色 2．光的选择性吸收 的光子的能量＝基态与激发态（吸收体）当一定光源所产生的电磁波通过某一溶液时，其中一部分频率的辐射能→被溶液介质吸收→质点由基态→激发态（激发态不稳定）→基态→能量以颜色的形式放出。 由于不同物质，其结构不同、能级不同→ 只有照射光之间的能量差波长的光→被吸收 结论：物质对光有选择性吸收 3．溶液的颜色 当白光透过溶液时→□→透过（其余波长）→ 溶液所显示的颜色 ↓ ↓ 吸收（一定波长的光） 其吸收光的互补色 * 单色光（monochromatic light）：具同一波长的光。 * 复合光（multiplex light）：由不同波长组成的光。 * 紫外光（ultraviolet light）：波长200~400 nm。 * 可见光（visible light）：人眼能感觉到的光，波长在400~750 nm。它是由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种色光按一定比例混合而成的 * 波段（wave band）：各种色光的波长范围不同。 * 互补色光（complementary color light）：按一定比例混合，得到白光（white light）。 * 物质的颜色是因物质对不同波长的光具有选择性吸收作用而产生的。 2 吸光光度法 Spectrophotometry 借助分光光度计来测量一系列标准溶液的吸光度，绘制标准曲线，根据被测试液的吸光度，从标准曲线上求得被测物质的浓度或含量。 Standard curve- calibrated curve- working curve 吸光光度法与目视比色法在原理上不同。吸光光度法是比较有色溶液对某一波长光的吸收情况，目视比色法则是比较透过光的强度。 例如，测KMnO4的含量，吸光光度法测量的是KMnO4溶液对黄绿色光的吸收情况，目视比色法则是比较KMnO4溶液透过红紫色光的强度。 吸收曲线 如果将不同波长的光通过一定浓度的某一溶液，分别测定溶液对各种波长的光的吸光度。以入射光的波长 λ 为横坐标，相应的吸光度 A 为纵坐标作图