高频rTMS对血管认知障碍大鼠srGAPs表达的影响.docVIP

精品论文 参考文献 高频rTMS对血管认知障碍大鼠srGAPs表达的影响 刘黎明 李永丽 官念 吴碧华 　　【摘 要】 目的 初步探讨高频rTMS对血管性认知大鼠海马srGAPs的表达的影响；方法 采用改良Pulsinelli四血管法大鼠全脑缺血模型建立VCI大鼠模型，并采用高频（10Hz）rTMS干预，Morris水迷宫测试观察行为学，western blot观察srGAPs蛋白的表达。结果 高频rTMS 能提高srGAPs蛋白在VCI大鼠海马组织中的表达水平。结论 srGAPs蛋白可能具有神经保护作用。 　　【关键词】 高频重复经颅磁刺激； 血管性认知障碍； 机制　　血管性认知障碍（Vascular Cognitive Impairment,VCI）是由脑血管危险因素、明显或不明显的脑血管病导致的认知功能下降综合征，包括轻微认知损害（MCI）到血管性痴呆（VaD）[1]。近年来众多研究表明高频重复经颅磁刺激（rTMS）对血管性痴呆大鼠的空间学习记忆有改善作用，但其机制目前尚不完全清楚[2]，尚需进一步探索。近年研究表明 Slit-Robo GTPase-activating proteins（srGAPs）与记忆有密切的关系。因此，本文主要初步探讨高频rTMS是否对srGAPs的表达有影响。 　　材料和方法 　　1．材料 　　1.1 动物及分组 正常健康12-14周龄雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠，体重260 ~ 300 g，普通级，由川北医学院动物实验中心提供，适应性饲养1周后随机分为正常组10只、假手术组13只，模型真刺激组36只，模型假刺激组36只。 　　1.2 主要试剂及仪器 SDS凝胶制备试剂盒（康为世纪）， 　　Spectra? Multicolor High Range Protein Ladder （Fermentas），超敏ECL化学发光试剂盒(碧云天)，rabbit Anti-SR GAP1 （博奥森），rabbit Anti-SR GAP2 （EPITMICS），rabbit Anti-SR GAP(博奥森)，Rabbit Anti-Tubulin-alpha 1（博奥森），BCA蛋白浓度测定试剂盒（碧云天），PVDF膜 （Millipore ），PMSF(武汉博士德生物工程有限公司)，磁刺激仪（magliter30 型）(Medtronic 公司,丹麦)，环形线圈（MCF-75）（ Medtronic 公司,丹麦），Morris 水迷宫(北京吉安得尔科技有限公司,中国)。 　　2．方法： 　　2.1模型建立 采用改良Pulsinelli四血管法大鼠全脑缺血模型建立血管性认知功能障碍动物模型，假手术组充分暴露大鼠翼状外孔后不烧灼，游离大鼠颈总动脉后不系线，第二天也不用微创动脉夹夹闭双侧颈总动脉，其余步骤同真手术组。 　　2.2 morris水迷宫 于术前、术后7天以及高频重复经颅磁刺激干预后第二天分别进行Morris水迷宫实验，包括定位航行试验（逃避潜伏期）和空间探索实验（在原平台象限游泳时间和跨跃原平台的次数）。 　　2.3重复经颅磁刺激 最大输出强度 4.2 T ，刺激参数： 10 Hz ，30%的最大输出强度，12串，100个脉冲/串，间隔30秒，每天一次，连续刺激两周。 　　2.4 western blot 冰上无菌刀片分离切取海马组织，用BCA法测量蛋白浓度，western blot法检测大鼠海马组织srGAP1、srGAP2、srGAP3的表达。 　　2.5 统计方法 实验数据以 表示，并用SPSS 17.0统计软件进行统计学处理，组间比较，如果满足正态分布和方差齐性条件，采用单因素方差分析；如果不满足正态分布和（或）方差齐性条件，采用Kruskal-Wallis H秩和检验，两两比较用“扩展的t检验法”，双侧尾检验，Plt;0.05认为差异有统计学意义。 　　结 果 　　1．水迷宫 　　造模前各实验组大鼠全时程平均逃避潜伏期和大鼠跨跃平台的次数、原平台象限游泳时间与正常对照组之间差异无统计学意义（Pgt;0.05）；手术后模型组全时程平均逃避潜伏期较正常对照组明显延长，跨跃平台的次数较正常对照组减少，原平台象限游泳时间明显缩短，二者差异有统计学意义（Plt;0.05），模型假刺激组与模型真刺激组的全时称平均逃避潜伏期和大鼠跨跃平台的次数、原平台象限游泳时间之间差异无统计学意义（Pgt;0.05），rTMS治疗14天后模型真刺激组全时程平均逃避潜伏期较模型假刺激组的缩短（Plt;0.05）和模型真刺激组的大鼠跨跃平台的次数较模型假刺激组增多以及原平台象限游泳时间较模型假刺激组延长，差异有统计学意义（Plt;0.05）。