黄芪建中丸微生物限度检查法验证试验.docVIP

精品论文 参考文献 黄芪建中丸微生物限度检查法验证试验 王亚辉1 徐洪艳3 韩风雨2 李洪泽1 孔新颖4 刘福青5（1.内蒙古天奇中蒙制药股份有限公司；2.内蒙古天奇药业投资（集团）有限公司；3.赤峰陆尔草中蒙药科技有限公司；4.内蒙古蒙吉药业科技有限责任公司；5.内蒙古博泰现代蒙药制剂研究开发有限公司；024000） 　　【摘要】目的：建立黄芪建中丸的微生物限度检查法并对其进行验证，保证微生物限度检查方法的科学性以及检验结果的准确和可靠性。方法：按《中国药典》2010年版一部附录微生物限度检查法项下方法对5 种规定试验菌株的回收率进行测定，对控制菌的检查法进行验证。结果：黄芪建中丸对大肠埃希菌、黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌无抑菌活性，回收率均不低于70%。控制菌的验证试验中，两种阳性控制菌大肠埃希菌、大肠菌群生长良好，阴性菌对照组未检出阳性对照菌。结论：确认了黄芪建中丸的微生物限度的检查方法，即用常规法检查黄芪建中丸的细菌霉菌酵母菌和控制菌结果可靠。 　　【关键词】方法验证；微生物限度检查；培养基稀释法【中图分类号】R2 【文献标号】A 【文章编号】1671-8725（2014）11-0144-02 　　建立黄芪建中丸的微生物限度检查法进行方法验证，以保证其微生物限度检查方法的科学性和准确性。黄芪建中丸主要由黄芪、肉桂、白芍、甘草、大枣五味组成，具有补气散寒，健胃和中的功效。用于脾胃虚寒所致的恶寒腹痛，身体虚弱。在建立黄芪建中丸的微生物限度检查法时采用lt;lt; 中国药典gt;gt;2010 年版一部附录微生物限度检查法对细菌霉菌和酵母菌计数方法验证，对规定的5种试验菌的回收率逐一进行验证及控制菌的检查方法验证，以证明所采用的方法适合于该药物微生物检查方法。 　　1 试验材料 　　1.1 试验环境在环境洁净度万级，局部洁净度百级的单向流空气的无菌室中进行。 　　1.2 培养基：营养琼脂培养基（批号090113）玫瑰红钠琼脂培养基（批号080522）胆盐乳糖培养基（批号090110）胆盐乳糖发酵培养基（批号090110）营养肉汤培养基（批号080612）改良马丁培养基（批号081105）MUG培养基（批号08080）曙红亚甲蓝琼脂培养基（批号08080） 　　1.3 试验菌株大肠埃希菌［CMCC(B)44102］金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501］白色念珠菌［CMCC(F)98001］黑曲霉菌［CMCC(F)98003］上述培养基各菌株均有中国药品生物制品检定所提供。 　　2 实验部分（一） 细菌，霉菌及酵母菌计数方法的验证 　　2.1 菌液制备 　　2.1.1 取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中，35℃～37℃培养18h～24h，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每ml含菌数为50cfu～100cfu的菌液备用。 　　2.1.2 取白色念珠菌的新鲜培养物接改良马丁培养基中，23℃～28℃培养的24h～48h，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至菌液浓度为每1ml含菌数50cfu～100cfu。 　　2.1.3 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23℃～28℃培养5d～7d，加0.9%无菌氯化钠溶液3ml～5ml洗下霉菌孢___________子，吸出孢子液，取1ml 孢子液至0.9%无菌氯化钠溶液9ml 中，使菌液浓度为50cfu/ml～100cfu/ml。 　　2.2 供试液的制备取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，振摇至供试品分散均匀，制成1∶10的供试液。 　　2.3 试验方法 　　2.3.1 药典常规法，取1毫升供试液注皿，分别加入五株试验菌，测定回收率。 　　2.3.2 培养基稀释法，取0.2 毫升供试品，分别加入五株试验菌，测定回收率。 　　2.4 回收率测定 　　2.4.1 菌液组分别取已制备好的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌黑曲霉、白色念珠菌的菌液1ml(含50～100cfu)，采用平皿计数法，含金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的实验平皿倾注营养琼脂培养基，每株试验组平行制备2个平皿，置30℃～35℃培养48h，计数;白色念珠菌、黑曲霉的实验平皿倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验组平行制备2个平皿，置23℃～28℃培养72h，计数。测定菌液中每毫升的活菌数。 　　2.4.2 供试品对照组取1∶100 供试液1ml，倾注营养琼脂培养基，每株试验组平行制备2个平皿，置30℃～35℃培养48h，测定供试品本底的细菌数;取1∶10 供试液1ml，倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验组平行制备2个平皿，置23℃～28℃培养72h，测定供试品本底的霉菌和酵母菌数。