2.2.1动物细胞培养和核移植技术ppt.pptVIP

注意关键词: 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 有关概念: 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 接触抑制 定义：细胞从接种到长满底物表面后，由于细胞繁殖数量增多相互接触后，不再增加。 思考题： 1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。 (1)成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖 (2)成块组织使细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。 3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？ 催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质(胶原蛋白等)。 4、细胞膜的主要成份是什么？ 蛋白质和磷脂 5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 能 6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？ 7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 注意时间的控制 不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近 8、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？ 易于培养细胞贴壁，进行生长增殖 一、动物细胞培养 1、过程： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 遗传物质未改变 遗传物质已改变 （分解弹性纤维） 获得细胞 细胞的全能性 植物体 培养结果 或细胞产物 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物细胞和动物细胞培养的比较 细胞群体 动物细胞培养技术应用 a、生产生物制品 b、与基因工程相结合 c、有毒物质的检测 克隆就是无性繁殖，具体地说，是指 一个共同的祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体。 a.分子水平上： b.细胞水平上： c.个体水平上： 1. 什么是克隆？ 一般指DNA克隆。 指一个单一的细胞分裂所形成的细胞群体。 指基因型完全相同的两个或一个群体。 动物细胞核移植技术和克隆动物 动物细胞核移植： 是将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞 核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的 胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物） 分类： 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度高，恢复全能性困难 卵细胞 C母绵羊子宫 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 细胞核移植 胚胎移植 早期胚胎 多莉羊 分娩 卵裂 融合后的卵细胞 细胞拆合技术 妊娠 多莉羊的培育过程 卵母细胞去核 体细胞取核 重组细胞 重组胚胎 新个体 电激 使两细胞融合 或核移植 MⅡ期（减Ⅱ中）的卵母细胞 显微操作仪 显微操作示意图 （2）核供体细胞的准备 在核移植操作中，细胞核供体细胞首先必须是完整的二倍体，该细胞必须保持有供体动物完整的基因组； 其次，供体细胞核必须能够在受体细胞质的作用下，产生细胞分化过程的倒转，变得如同刚刚受精的合子一样，能重新完成从受精到发育成一个正常动物个体的全过程。 供体细胞主要有两大类：胚胎卵裂球、体细胞、胚胎干细胞和胎儿成纤维细胞。 （3）细胞核移植 常用的核移植方法有两种，即胞质内注射和透明带下注射。胞质内注射是用一个外径5～8μm 的注核针吸取供体核后直接注射进卵母细胞胞质内的方法。透明带下注射则是把供体细胞核注射在透明带与卵母细胞之间的卵周隙中，核移植后用电刺激进行细胞融合。 整个过程用了哪些技术？ 细胞培养、核移植、胚胎移植 新生牛的性别、基因？ 性别与供体相同、基因与供体的基本相同 繁殖方式？ 无性繁殖 原理？ 动物细胞核的全能性 归纳: 1、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞。 不是 1、卵母细胞为减数第二次分裂中期的次级卵母细胞 2、原因？ 细胞比较大，易操作 细胞质中含有使体细胞核全能性表达出来的物质 3、克隆过程运用的技术手段？ 动物体细胞核移植、动物细胞培养和胚胎移植 4