细菌感染的病原学诊断PPT.ppt

2018-1-28 1 第三章 细菌感染的病原学诊断褚云卓 2018-1-28 2 本章内容 第一节 标本的采集和处理原则 第二节 细菌的形态学检查 第三节 细菌的分离培养和鉴定 第四节 细菌的非培养检测方法 2018-1-28 3 第一节 标本的采集和处理原则 一、标本采集的一般原则 1．早期采集 2．无菌采集 3．根据目的菌的特性用不同的方法采集 4．采集适量标本 5．安全采集 2018-1-28 4 第一节 标本的采集和处理原则 二、标本的处理 1. 对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检 2. 其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室 3. 若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存 4. 一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h 2018-1-28 5 ５.病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全防护 ６.标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出 ７.对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须按规定包装，由专人运送 ８.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送 2018-1-28 8 第二节 细菌的形态学检查 3.有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作出初步鉴定 如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似流星状运动的细菌，制动试验阳性，可初步推断为“疑似O1群霍乱弧菌”。 2018-1-28 9 第二节 细菌的形态学检查 二、染色标本 （一）常用染料 1．碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等 2．酸性染料：有伊红、刚果红等 3．复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）等；荧光染料有荧光标记的抗体 2018-1-28 10 第二节 细菌的形态学检查 （二）常用的染色方法 1．革兰染色（gram stain） 革兰阳性球菌 革兰阴性杆菌 2018-1-28 11 第二节 细菌的形态学检查 2．抗酸染色 （acid-fast stain） 可将细菌分为两大类： 即-抗酸性细菌 -非抗酸性细菌 2018-1-28 12 第二节 细菌的形态学检查 3．荧光染色 （1）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。 （2）主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。 2018-1-28 13 第二节 细菌的形态学检查 4.鞭毛染色 可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数量，在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。 5.异染颗粒染色 用于白喉棒状杆菌染色。 2018-1-28 14 第二节 细菌的形态学检查 6.芽胞染色： 绿色部分 为芽胞 2018-1-28 15 第二节 细菌的形态学检查 7.墨汁染色: 一般用于新型隐球菌检查 2018-1-28 16 第三节 细菌的分离培养和鉴定 一、培养基的种类和选择 培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择 二、分离及培养 细菌的分离、细菌培养方法 三、生化反应和鉴定 碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验 2018-1-28 17 第三节 细菌的分离培养和鉴定 一、培养基的种类和选择 培养基（culture medium） 是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。 2018-1-28 18 第三节 细菌的分离培养和鉴定 (一)培养基的组成成分 1．营养物质 蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、 无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子 2．凝固物质 琼脂、明胶、卵白 3．抑制剂和指示剂 2018-1-28 19 第三节 细菌的分离培养和鉴定 （二）培养基种类 1．基础培养基（based medium） 2．营养培养基（nutrient medium） 3．鉴别培养基（diferential medium） 4．选择培养基（selective medium） 5．特殊培养基（special medium） 2018-1-28 20 第三节 细菌的分离培养和鉴定 1．基础培养基 含有基础生长所需的基本营养成分，最常用的是肉浸液，俗称肉汤（broth），主要成分含牛