细胞和组织克隆体的发生和发育.ppt

第十一章细胞和组织克隆体的发生和发育 王毅 目录 克隆的理论基础-细胞的潜在全能性 细胞核组织培养中形态建成式样 细胞和组织培养中的PCD 细胞和组织培养的科学意义和使用价值 克隆的基础理论—细胞的潜在全能性 20世纪初（1902）德国科学家Haberlandt第一次根据细胞学说推测，将高等植物分离出细胞或组织进行培养，就有可能使之表现出它们的潜在全能性，发育成完整的植物体。 他实验没有成功但是提出了具有远见卓识的3点设想： 1.分化的细胞停止分裂是应为它们失去了来自整个植物体的或者其中一部分的分裂刺激，他甚至还提出了这种刺激时“生长酶”。 2.值得培养的细胞可能是萌发的花粉粒。 3.应当对培养基补充以营养颈部的提取物。 第一个将这一设想转变为事实的科学家是德国植物学家Reinert(1958)，他用胡萝卜体细胞根的韧皮部细胞培养出了胚状体。 现在通常将用于培养的细胞、组织、器官或者器官片段称作“外植体” 现代的观点，所谓细胞潜在的全能性，就是植物体中任何一个没有超过分化临界期的细胞，都可以在一定条件下发育成一个完整的植物体或任何组织器官，也就是说他们具有发育成一个完整植物体的或任何组织或器官的潜能。 对于分化到一定阶段的细胞来说，这通常包括“脱分化”和“在分化”两个相反的过程。 脱分化：由较分化的细胞转变成较不分化的细胞的过程。 再分化：由已脱分化的细胞重新分化达到一定阶段的细胞就叫“再分化” 细胞和组织培养中形体建成的式样 1.愈伤组织的形成 2.影响愈伤组织形成的因素 3.愈伤组织的分化 1.胚状体的起源和发育 2.影响胚状体发生和发育的条件 3.胚状体途径和愈伤组织途径的关系 愈伤组织或单极性结构途径 胚状体途径 一.愈伤组织或单极性结构途径 这是细胞培养和组织培养中最常见的一种发育途径。 人工培养下的细胞或组织经过脱分化过程分裂而不断增殖，从而发生一种新的生长类型形成不定型的细胞群即愈伤组织。 愈伤组织：主要由一群近乎等径的薄壁组织细胞形成的不规则的、没有特定器官的细胞团。 影响愈伤组织的形成因素 创伤刺激 化学环境 外植体生理状态 首先引起创伤激素产生，可能起着扳机的作用，开启某一生化过程 生长调节剂控制愈伤组织的发生和形成，生长素有利于愈伤组织的形成。（2，4-D） 植物种类，器官，发育阶段等的不同都会影响愈伤组织的形成 光‘、温度、湿度都会影响愈伤组织的形成。有些植物仅靠光便能诱导产生愈伤组织 愈伤组织形成时分裂相大大增加 物理因素的影响 分裂相 愈伤组织的分化 当愈伤组织转移到分化培养基上以后，就开始分化。 分化形成小植株的途径 由愈伤组织分化形成小植株的途径主要分为单极性和双极性途径。 具体表现为 先形成胚状体 ：胚状体通常由愈伤组织表面分散的细胞或细胞团发生， 通过多次分裂形成球形胚，并逐渐形成子叶原基，随后发育成小子叶。 随后的发育与合子胚一样。 先形成芽：属不定芽，起源于愈伤组织表面的散生分生组织细胞团。 分裂形成芽端分生组织，当芽长到一定程度变可诱导出根形成完整小植株。 先形成根：根的形成往往是内起源，先形成根源基于微管组织附近。 分别诱导出根和芽：相邻部位的愈伤组织分别分化出芽和根然后通 过两者之间的微管组织节使他们的微管组织相连形成同一系统一 棵完整的小植株。 特定器官的诱导：用什么组织就容易形成什么器官。脱分化不完全只脱分化到这 一器官的最原始形态。 影响分化途径的因素 植物生长调节剂：种类和浓度的不同影响不同组织形成的先 后。生长素对根的生长有明显的促进作用。但如果用高浓度 的2，4-D则抑制根的形成，2，4-D明显使细胞变得不稳定， 丧失形态建成的能力。对于单子叶植物2，4-D可作为生长素 选用，而对于双子叶植物则不能。 物理因素：光周期和温度对芽和根的形成没有决定性的作 用不同的光对不同的物质影响不同。一定的温度有利于愈伤 组织中的器官建成，并且存在最高和最低的极限温度。 二.胚状体途径 也可以称作双极性结构途径。组织培养中形成胚状体，进而发育成小植株,是又一细胞核组织培养中形态建成的普遍方式。 这种结构不像芽和根发生那样是单极性的，而是先形成具有明显分界的茎叶和根两极形状很像胚。他在有机体构成的方式和功能上都与合子胚相似，具有明显的两极。 胚状体的起源和发育 组织培养中，胚状体往往由处于孤立化状态的细胞发生。在细胞悬浮培养中游离的细胞发生胚状体的频率最高。这些孤立化细胞形成胚状体的过