第十四章 单克隆抗体.ppt

* Emil von Behring, 1901, antitoxins Georeges Kohler and Cesar Milstein, 1984, monoclonal antibody Susumu Tonegama,1987, structure of Ig gene Gerald Edelman and Rodney Porter, 1972, structure of antibody Paul Ehrlich , 1908, production of antibody Nobel Prize winners 发明单克隆抗体技术 Nobel Prize in 1984 抗体发展的三个阶段 单克隆抗体 基因工程抗体 多克隆抗血清 传统抗血清 抗 原 免 疫 所有抗体混合 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 脾 脏 淋巴結 B 細胞 细胞工程杂交瘤技术 鼠单抗 人单抗 大鼠 小鼠 产量高、操作比小鼠麻烦 少用 易操作、多用 HAMA反应 人人杂交瘤 人B细胞、骨髓瘤细胞融合 人鼠杂交瘤 人B细胞、鼠骨髓瘤细胞融合 杂交瘤制备人单抗的问题：染色体易丢失、抗体分泌不稳定 美国已上市16种单克隆抗体药物 2002年销售额 29亿美元 2005年 90亿美元 我国的单克隆抗体药物市场还处于起步阶段。 SDA批准进入临床的治疗用单抗 抗T细胞免疫毒素 抗C-ALL免疫毒素 131I-抗肝癌单克隆抗体 抗人CD25单克隆抗体 抗乙脑单克隆抗体 抗流行性出血热抗体 抗人CD3单克隆抗体 抗人IL-8单克隆抗体 抗体治疗疾病的机制 抗原失活 免疫效应细胞吞噬 抗原表面弱化易受补体破坏 单抗研发的演变历程 鼠单抗 100% 鼠源 OKT-3 Panorex Zevalin 鼠/人嵌合单抗 (66-75 % 人源) ReoPro, Rituxan Remicade Simulect 人源化单抗 (90-95 % 人源) Zenapax, Mylotarg, Herceptin, Campath Synagis 100% 人源 抗体攻击病毒 凝集细菌 抗 SARS 的单抗 SARS-CoV Epitope, Antigenic determinant 抗原決定基 ● 一个抗原分子上可能有数个抗原決定基 ● 每個 抗原決定基 至少誘生一種專一性抗体 ● 蛋白质性 抗原決定基 含有六个以上氨基酸 1 多克隆抗血清 对健康人用疫苗进行主动免疫，免疫前（a）和免疫后10天 （b）分别采血并对血清蛋白进行凝胶电泳分析。免疫前血清中的g 球蛋白条带较宽，免疫之后则相对集中。Bruton 氏病患者血清蛋白中的 ?球蛋白条带缺失（c）。 a1 a2 b g 白蛋白 球蛋白 （c） （a） （b） 绵羊红细胞的制备流程图 摇动 15-20min 4℃ 可保存3周 取适量 NS洗涤3次 2000r/min 10min NS稀释至 2～5% 细菌细胞抗原的制备流程图 液体培养或 斜面培养 37℃24h 100℃水浴 2～2.5h 杀菌 无菌试验 NS稀释成8～10亿/ml O菌体抗原 杂交瘤技术过程 * * 米尔斯坦（Cesar Milstein）和克勒（Georges Kohler）发明单克隆抗体技术（1984年医学奖）。