水质 粪大肠菌群的测定（多管发酵法和滤膜法）HJ347-2007.pdfVIP

水质 粪大肠菌群的测定 粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便。在 44.5 ℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产 气的大肠菌群称为粪大肠菌群。用提高培养温度的方法，造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的 条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。 粪大肠菌群的测定可以用多管发酵法和滤膜法。 第一篇 多管发酵法 1 适用范围 本标准适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定。 2 原理 多管发酵法是以最可能数（most probable number ）简称MPN 来表示试验结果的。实际上它是根 据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。如果从理论上考虑，并且进行大 量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。不过只要每一稀释度试管重复数目增加， 这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。因 此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。 3 培养基和试剂 本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂；实验用水为新制备的去离 子水。 3.1 单倍乳糖蛋白胨培养液： 成分： 蛋白胨 10g 牛肉浸膏 3g 乳糖 5g 氯化钠 5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL 蒸馏水 1000mL 制法：将蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加热溶解于 1000mL 蒸馏水中，调节 pH 为 7.2～7.4，再加 入 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器 中，在 115℃灭菌20min ，贮存于暗处备用。 3.2 三倍乳糖蛋白胨培养液：按上述配方比例三倍（除蒸馏水外），配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液， 制法同上。 1 3.3 EC 培养液： 成分： 胰胨 20g 乳糖 5g 胆盐三号 1.5g 磷酸氢二钾（K HPO ） 4g 2 4 磷酸二氢钾（KH PO ） 1.5g 2 4 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL 制法：将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。置高压蒸汽灭菌器中，115℃灭 菌 20min 。灭菌后pH 应为 6.9 。 3.4 培养基的存放 在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于 30℃的暗处，存放时应避免阳光直 接照射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养液颜色变化，或体积变化明显时废弃不用。 4 步骤 4.1 水样接种量 将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接 种。同一接种水样量要有五管。 相对未受污染的水样接种量为 10mL、1mL、0.1mL 。受污染水样接种量根据污染程度接种 1mL、 0.1mL、0.01mL 或 0.