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蛋白质的结构与功能 蛋白质(protein):是由氨基酸(amino acids)通过肽键(peptide bond)相连形成的高分子含氮化合物。 蛋白质的功能: 生物体重要结构成分 重要的生物学功能物质 氧化供能物质 蛋 白 质 的 分 子 组 成The Molecular Component of Protein ? 组成蛋白质的元素 C：50～55%； H： 6 ～8%； O：19 ～24%；N：13 ～19%； S：0 ～4%； 有些蛋白质含P、Fe、Cu、Zn、Mn、Co、Mo等。 蛋白质元素组成的特点: 平均含氮量16％。  一、氨基酸 —— 组成蛋白质的基本单位 自然界中的氨基酸有300余种，人体蛋白质含20种基本氨基酸。 L-氨基酸（甘氨酸除外）。 二、肽 （二） 几种生物活性肽 1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH) 神经肽(neuropeptide):在神经传导中起信号转导作用的肽。如： 脑啡肽（5肽）；β内啡肽（31肽）； 强啡肽（17肽）；孤啡肽（17肽）； P物质（10肽，RPKPQFFGLM）； 第 二 节蛋 白 质 的 分 子 结 构The Molecular Structure of Protein 五、蛋白质的分类 一级结构相似，构象、功能相似 氨基酸序列提供重要的物种进化信息 氨基酸序列的改变可影响构象和功能，导致疾病。 Mb与Hb的结构相似，都能可逆地与O2结合。 Mb 为单体蛋白，每分子Mb结合一分子氧。Hb四条多肽链，各含一个血红素，各结合一分子氧，每分子Hb可结合4分子氧。 Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。 * 协同效应(cooperativity) 一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应。 正协同效应(positive cooperativity): ——促进 负协同效应(negative cooperativity): ——抑制 变构效应(allosteric effect) 蛋白质空间结构的改变伴随其功能的变化，称为变构效应。 蛋白质的凝固作用(protein coagulation) 蛋白质在等电点变性形成不溶性絮状物（可溶于强酸和强碱中）——结絮；次絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中——凝固。 亲和层析—根据配基特异性： 蛋白质在50万g的重力作用下逐渐沉降，直至其浮力与离心力相等。 超速离心法既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。 蛋白质在离心场中的行为用沉降系数(sedimentation coefficient, S)表示,沉降系数与蛋白质的密度和形状相关 。 dx/dt ω2x dx/dt代表颗粒在离心场中的移动速率； ω为离心头的角速度；x是距转动中心的距离，t为时间 沉降系数S使用Svedberg单位，1S=10-13秒。 因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系，故可应用超速离心法测定蛋白质分子量，但对分子形状的高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用。 A : siRNA-CDK2 group (241) ; B: control (297 ） （四）层析(chromatography) 分配层析分离蛋白质的原理 待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的 。 蛋白质分离常用的分配层析方法 * 离子交换层析：利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。 * 凝胶过滤(gel filtration)又称分子筛层析，利用各蛋白质分子大小不同分离。 混合蛋白质 配体固化在不溶性载体 其它蛋白直接通过 特异蛋白与配体结合 加入可溶性配体 特异蛋白与可溶性配体结合被洗脱 （五）超速离心(ultracentrifugation) ×1013 S= 正常 红细胞 镰刀型 红细胞 （一）肌红蛋白与血红蛋白的结构 二、蛋白质空间结构与功能的关系 Mb的氧结合曲线为直角双曲线，说明Mb易结合氧。 Hb的氧百分饱和度随氧浓度变化而改变，呈S状曲线。提示四个亚基与氧结合的平衡常数不同。 （二）血红蛋白的构象变化与结合氧 Hb在结合氧的过程中有构象变化: 未结合氧T态：α/β和α/β对角排列，结构紧张，与氧亲