大豆查尔酮还原酶GmCHR基因的克隆及其在烟草中的表达 Cloning of Chalcone Reductase GmCHR Gene and Its Expression in Tobacco.pdfVIP

吉林农业大学学报　 ２０１４，３６（５）：５４６～５５３ ｈｔｔｐ：／ ／ ｘｕｅｂａｏ．ｊｌａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｊｌｎｄｘｂ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ 大豆查尔酮还原酶ＧｍＣＨＲ基因的克隆及其在 烟草中的表达∗ １ ２∗∗ １ １ ２ ２ 魏洪波 ，王丕武 ，张　 卓 ，刘　 强 ， 曲　 静 ，李　 丹 １． 吉林农业大学生命科学学院，长春 １３０１１８；２． 吉林农业大学农学院，长春 １３０１１８ － 摘　 要：以大豆品种“吉农２８”为材料，利用ＲＴ ＰＣＲ技术获得ＧｍＣＨＲ基因序列，并选择其中９１８ｂｐ 的开放 阅读框，以ｐＢＩ１２１为基础载体，构建了由３５Ｓ启动子驱动的ＧｍＣＨＲ植物表达载体，转入烟草中并对１７株抗 卡那霉素的转基因烟草进行ＰＣＲ、ＧＵＳ染色、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交检测，对植株中ＧｍＣＨＲ基因ｍＲＮＡ表达量进行荧 光定量ＰＣＲ检测，采用高效液相色谱技术测定转基因植株中查尔酮还原酶催化产物异甘草素的含量。 结果 表明：ＧｍＣＨＲ基因成功整合到烟草基因组中并能够成功表达；在转基因植株中目的基因的ｍＲＮＡ 均有表达， 且不同植株间表达量存在差异；转化烟草叶部组织中异甘草素的平均含量为（７５２８±００１８）μｍｏｌ／ ｇ，而转空 载体烟草中未检测出异甘草素。 关键词：大豆；查尔酮还原酶；基因克隆；烟草 中图分类号：Ｑ７８５　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 文章编号：１０００⁃５６８４（２０１４）０５⁃０５４６⁃０８ ＤＯＩ：１０．１３３２７／ ｊ．ｊｊｌａｕ．２０１４．２０３２ 引文格式：魏洪波，王丕武，张卓，等．大豆查尔酮还原酶ＧｍＣＨＲ基因的克隆及其在烟草中的表达［Ｊ］．吉林农 业大学学报，２０１４，３６（５）：５４６⁃５５３． Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ Ｃｈａｌｃｏｎｅ Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ＧｍＣＨＲ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｔｏｂａｃｃｏ １ ２ １ １ ２ ２ ＷＥＩ Ｈｏｎｇ⁃ｂｏ ，ＷＡＮＧ Ｐｉ⁃ｗｕ ，ＺＨＡＮＧ Ｚｈｕｏ ，ＬＩＵ Ｑｉａｎｇ ，ＱＵＪｉｎｇ ，ＬＩ Ｄａｎ １． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３０１１８，Ｃｈｉｎａ；２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｏｎｏｍｙ，ＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３０１１８，Ｃｈｉｎａ － Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＧｍＣＨＲｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ ｓｏｙｂｅａｎｖａｒｉｅｔｙ “ｊｉｎｏｎｇ２８” ｂｙ ＲＴ ＰＣＲｔｅｃｈ⁃ ｎｉｑｕｅ． Ｔｈｅ ９１８ ｂｐ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｉｎ ｔｈａｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅ． Ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｐＢＩ１２１ｃａｒｒｉ⁃ ｅｒ，ａ ＧｍＣＨＲ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂｏｔａｎｙ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｄｒｉｖｅｎ ｂｙ ３５Ｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ａｎｄ ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ｉｎｔｏ ｔｏｂａｃｃｏ． Ｓｅｖｅｎｔｅｅｎ ｐｌａｎｔｓ ｏｆ ｋａｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｔｏｂａｃｃｏ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｍｏ⁃ ｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ＰＣＲ ａｎｄ Ｓｏ