牛FADD基因过表达和 RNAi载体构建及在牛胎儿成纤维细胞中的表达 Over-expression and RNAi Vector Construction of Cattle FADD Gene and Its Expression in Bovine Fetal Fibroblasts.pdfVIP

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2018-01-30 发布于上海
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牛FADD基因过表达和 RNAi载体构建及在牛胎儿成纤维细胞中的表达 Over-expression and RNAi Vector Construction of Cattle FADD Gene and Its Expression in Bovine Fetal Fibroblasts

吉林农业大学学报，（）：，：２０１４３６２１９９～２０４２１２ｈｔｔｐ／／ｘｕｅｂａｏ．ｊｌａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ：ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＥｍａｉｌｊｌｎｄｘｂ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ牛ＦＡＤＤ基因过表达和ＲＮＡｉ载体构建及在牛胎儿成纤维细胞中的表达 赵茂鑫，于海滨，李傲楠，赵志辉，杨润军，芦春艳１１１１１２ 吉林大学动物科学学院，长春；吉林大学农业实验基地，长春１．１３００６２２．１３００６２摘要：（）存在于系统中，是信号传导通路的一个信号连接蛋ＦＡＤＤＦａｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｄｅａｔｈｄｏｍａｉｎｐｒｏｔｅｉｎＦａｓ／ＦａｓＬ白，通过传递凋亡信号，从而介导细胞凋亡。为进一步验证基因抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的ＦＡＤＤＦＡＤＤ作用，从牛卵巢组织中扩增ＦＡＤＤ基因，将ＦＡＤＤ基因连接到带有绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体ｐＡｃＧＦＰＮ１中，构建过表达ＦＡＤＤ基因载体，并构建ＦＡＤＤ基因的ＲＮＡｉ载体；用脂质体介导法将ＦＡＤＤ基因载体、真核表达载体转染到牛胎儿成纤维细胞中，观察有无荧光的表达，并使用和ＲＮＡｉＲｅａｌＴｉｍｅｑＰＣＲＷｅｓｔ ｅｒｎｂｌｏｔ方法检测ＦＡＤＤ基因ｍＲＮＡ、蛋白水平的表达情况。结果表明：成功构建出ＦＡＤＤ基因ＲＮＡｉ载体和高表达载体，重组质粒转染牛胎儿成纤维细胞２４ｈ后在荧光显微镜下可观察到绿色荧光，转染效率可达５０％。关键词：；载体；；牛胎儿成纤维细胞ＦＡＤＤＲＮＡｉｐＡｃＧＦＰＮ１中图分类号：文献标识码：文章编号：（）Ｓ８２３２Ａ１０００５６８４２０１４０２０１９９０６：ＤＯＩ１０．１３３２７／ｊ．ｊｊｌａｕ．２０１４．１９０７引文格式：赵茂鑫，于海滨，李傲楠，等牛基因过表达和载体构建及在牛胎儿成纤维细胞中的表．ＦＡＤＤＲＮＡｉ达［］吉林农业大学学报，，（）：，Ｊ．２０１４３６２１９９２０４２１２．ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＲＮＡｉＶｅｃｔｏｒＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＣａｔｔｌｅＦＡＤＤＧｅｎｅａｎｄＩｔｓＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＢｏｖｉｎｅＦｅｔａｌＦｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ１１１１１２，，，，，ＺＨ