乳酸乳球菌食品级诱导表达系统的构建及异源蛋白的表达-微生物学报.PDFVIP

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2018-02-09 发布于天津
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乳酸乳球菌食品级诱导表达系统的构建及异源蛋白的表达-微生物学报.PDF

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卷期 ! ! 微生物学报 !（）： ! $! ’ $( 年月日 #$$ % ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! )*+*,- #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 乳酸乳球菌食品级诱导表达系统的构建及异源蛋白的表达， 3 3 3 3 # 徐波，曹郁生，陈燕，郭兴华 3 （食品科学教育部重点实验室南昌大学中德联合研究院南昌 ..$$! ） # （中国科学院微生物研究所北京 3$$$%$ ）摘要：以 2!! 基因为食品级选择标记构建了乳酸乳球菌食品级高效诱导细胞内和细胞壁锚定表达系统，并用 ! 这一表达系统表达了铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因 #$ %C ’ 。首先以DE)5%$$ 和 DFG%$!% 构建了含有 2!! 、 ! ( 2-./2 0 和复制子的乳酸乳球菌食品级细胞内诱导表达载体DEF)!%，再以DEF)!% 和DH844#! 为出发载体 ! )*+, $1$2 构建了含有、和复制子的乳酸乳球菌细胞壁锚定诱导表达载体。然后 3!! ( 3/(4 3)78,3.9, 3;;= DEFH!% ! ! )*+, +$56 -: 以食品级载体DEF)!% 和DEFH!% 为基础，构建了不含抗生素抗性选择标记的铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因的表达质粒DEF)!%2IDJ5C K 和DEFH!%2IDJ5C K。利用L:,:L 进行重组乳酸乳球菌菌株的诱导表达，通过 MNM2O)P8 和 Q0,-0JL B1?- 分析，检测到表达蛋白分别占细胞内可溶蛋白的( R S 和细胞壁锚定蛋白的( R%S ，表达产物具有免疫原性，可与含IDJ5C K 的乳球菌以及铜绿假单胞菌发生特异性的凝集反应。关键词：乳酸乳球菌；食品级载体；诱导表达系统；融合外膜蛋白中图分类号：；文献标识码：文章编号：（） T% T(. ) $$$32#$( #$$ $!2$$!2$ 乳酸菌（，）广泛存在于自是可控制的蛋白质生产的理想的系统，其应用前景 16-: 6:U B6-0J:6 V)W ［，］然界，是人和动物正常菌群的主要成员，因其重要的