乳酸乳球菌fabZ1和fabZ2基因功能的鉴定-生物化学与生物物理进展.PDFVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2014, 4 1(8): 777~786 乳酸 球菌f abZ1 和f abZ2 基因功能的鉴定* 马金成 罗 彪 胡 王海洪** ( 南农业大学生命科学学院，广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室，广州510642) 摘要 大肠杆菌(Escherichia coli)是 型脂肪酸合成系统的模式生物，3- 羟基脂酰ACP 脱水异构酶(FabA)是不饱和脂肪酸合 成中的关键酶 生物信息学分析表明，乳酸乳球菌(Lactococcus lactis) 的基因组中没有标注为3- 羟基脂酰ACP 脱水异构酶的 基因，但有两个标注为3- 羟基脂酰ACP 脱水酶基因L lfabZ1 和Llf abZ2 ，其编码的蛋白质与EcFabZ 的相似性分别为41%和 45.1%，且都具有3- 羟基脂酰ACP 脱水酶两个保守的 螺旋结构 用携带 和 的质粒载 遗传互补大肠杆菌 琢 LlfabZ1 LlfabZ2 f abA 温度敏感突变株CY57，在42 ℃下不能恢复生长，但无细胞抽提物的结果显示LlFabZ1 能够使反-2- 癸烯酰ACP 异构成 顺-3- 癸烯酰ACP ，而LlFabZ2 则不能 互补大肠杆菌f abZ 突变株HW7 显示，在诱导的条件下，含有LlfabZ2 的转化子能 够恢复生长，而Llf abZ1 则不能 体外重建脂肪酸合成反应及蛋白质活性测定表明，LlFabZ1 具有3- 羟基脂酰ACP 脱水异构 酶功能，而LlFabZ2 只具有3- 羟基脂酰ACP 脱水酶功能 另外，未得到Llf abZ1 和Llf abZ2 的突变株，表明LlFabZ1 和 LlFabZ2 可能是乳酸乳球菌脂肪酸合成酶系中的必不可少的关键蛋白 上述结果证实了乳酸乳球菌f abZ1 和f abZ2 两个基因 在脂肪酸合成中的功能 关键词 乳酸乳球菌，细菌脂肪酸合成，3- 羟基脂酰ACP 脱水异构酶，3- 羟基脂酰ACP 脱水酶 学科分类号 Q93 DOI: 10.3724/SP.J.1206.20 14.00025 细菌不饱和脂肪的合成机制首先是由Bloch 等 阳性细菌的基因组中不存在 - 同源基因， f abA f abB 于 20 世纪 60 年代在研究丁酸梭菌(Clostridium 催化这些细菌的不饱和脂肪酸合成的酶不同于大肠 [1-2] butyricum) 时提出 ，后来在大肠杆菌中鉴定了相 杆菌的FabA 和FabB 研究发现，在肺炎链球菌 [3-5] 应的酶蛋白 ：FabA (3- 羟基癸脂酰ACP 脱水异 (Strep tococcus p neumoniae) 和 变 异 链 球 菌 构酶)和FabB (3- 酮基脂酰ACP 合成酶 ) FabA ( ) 中，有一个反-2- 顺-3 烯酰 玉 Strep tococcus mutans 使 3- 羟基癸脂酰ACP 脱水，形成反-2- 癸烯酰 ACP 异构酶(FabM)[9] ，它可以将由FabZ(3- 羟基脂 ACP，部分反-2- 癸烯酰ACP 被烯脂酰ACP 还原 酰ACP 脱水酶)脱水产生的反-2- 癸烯酰ACP 异构 酶(FabI)还原，用于饱和脂肪酸的合成，最终生成 成顺 -3- 癸烯酰 ACP