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生化标准化操作规程 血清肌酸激酶(CK)测定 1. 实验原理 CK ADP + 肌酸磷酸 —————→ 肌酸 + ATP HK ATP + 葡萄糖 —————→ ADP + G-6-P G-6-PDH G-6-P + NAD+ —————→ 6-磷酸葡萄糖酸 + NADH + H+ 在340nm波长处测定NADH的生成速率，计算出CK活力。2. 标本： 2.1 病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。 2.2 类型：血清、EDTA血浆，应避光保存。 3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。 4. 标本运输：冰冻条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血等存运输的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂：中生肌酸激酶试剂盒（ 试剂1＋试剂2） 6.1.1 试剂组成 试剂1：2×60 ml 试剂2:1×30 ml R1 氯化镁 10mmol/L 多茶碱 20g/L 乙二胺四乙酸 2g/L 磷酸肌酸 30mmol/L D-葡萄糖 20mmol/L 咪唑缓冲液(pH6.5) 100mmol/L R2 2氨基2甲基1丙醇 5mmol/L 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 2000U/L AP5A 10g/L 己糖激酶 3000U/L 二磷酸腺苷 2mmol/L 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 2mmol/L 06.1.2 试剂准备：试剂为双液即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为12个月。试剂必需避光保存。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂空白吸光率Anm(1.0cm)＞0.6，或有混浊和可见颗粒时，请不要再使用。试剂请勿直接接触皮肤、眼睛，如有接触，请用大量清水清洗。请勿吞服。.SOP文件 6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件 7. 仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪 8. 操作步骤 8.1AU640开机： 8.1.1确认两瓶清洗剂有足够的量。 8.1.2打开蒸馏水供应系统的阀门。 8.2.3打开绿色键开关,有报警请参考《AU640使用说明书》酌情处理。 8.1.4在〖Start Condition〗屏幕，输入当日相应信息，并退出。 8.1.5确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足应添加并在系统状态中的试剂状态检查试剂。 8.1.6在急诊台Wash 1的位置的试管中加满2%清洁液原液。 8.1.7待仪器处于Stand-by状态时打开中文电脑开关，中文电脑进入AU640系统后，打开打印机。 8.2开始分析： 8.2.1把定标液、质控和标本架放在仪器的Rack Feed上。 8.2.2用鼠标点击在屏幕最上方〖开始分析〗图标。 8.2.3 点击EXIT退出键退到主屏幕。 分析参数： 样品体积 10μl 吐水量 0μl 试剂 Ⅰ体积 200μl 吐水量 50μl 试剂Ⅱ 体积 100μl 吐水量 50μl 波长 340/410nm 方法 RATE 读点 19/25 温度 37℃ 完整的实验参数与操作程序可以在AU640用户手册中查到。 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：以olympus校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以U/L报告。 12. 参考值范围： 血清：24-195U/L（参照《全国临床检验操作规程》的正常值范围。） 13. 临床意义： CK以及CK同工酶活性测定用作心肌梗塞以及心