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第四节 结构研究法 ▓ 结构研究的必要性 ▓ 天然药物结构研究中的困难 ① 结构事先很难作出某种程度的预测； ② 经典的化学方法难于满足研究天然 药物结构的需要； ▓ 天然药物结构研究的主要手段： 波谱学分析方法 一、化合物的纯度测定方法 1、在显微镜下观察晶形 2、测熔点 3、应用TLC检识 4、应用HPLC检识 二、结构研究的主要程序 1、确定化合物结构的程序 ① 先推测被确定成分的结构类型 ② 然后推测取代基类型、位置和分子式 ③ 确定结构式 2、确定化合物结构常用的方法 ① 化学法 ② 波谱法（UV、IR、NMR、MS）和CD、 ORD、X-射线结晶衍射法等 3、未知天然化合物结构研究程序 ①?初步推断化合物的类型 ② 测定分子式，计算不饱和度 ③??测定分子中含有的官能团，或结构片段，或基本骨架； ④?推断并确定分子的平面结构； ⑤ 推断并确定分子的主体结构(构型与构象) 4、已知天然化合物的结构研究程序 ① 研究过程大为简化 ② 无固定模式与程序 5、结构研究中文献检索的重要性 ◆ 贯穿于化合物结构研究的全过程 ① 按植物拉丁学名或中药学名，利用主题索引 或通过计算机系统查阅C.A； ② 检索内容包含： 同属同种植物的药用部位、使用溶剂名称、 提取的部位、分离的方法、单体化合物的性质、 分子式、颜色反应、光谱学数据等等。 三、结构研究中采用的主要方法 （一）确定分子式的常用方法 1.元素分析配合分子量测定 （1）元素分析包括定性分析与定量分析 例如：从刺果甘草根中分得某白色晶体，元 素定性分析表明该白色晶体只含C、H、O三 元素,元素定量分析的结果如下, C:79.35%; H:10.21%。 例如：采用电子轰击质谱（EI-MS）测得上述 化合物的分子离子峰为456。 那么，n=456÷152=3 结合实验式 C10H16O 得上述化合物的分子式为：C30H48O3. （C30H48O3 代表刺果甘草皂苷元） 2、高分辨率质谱（HR-MS）法 ? 高分辨率质谱仪可将物质的质量精确到小数点后第三位。 ? 例如：C8H12N4、C9H12N2O、C10H12O2、C10H16N2 四个化合物的分子量同为164，但精确质量则并不相同，在高分辨率质谱仪中很容易进行区别。 序号 分子式 精确质量 M1 C8H12N4 164.1063 M2 C9H12N2O 164.0950 M3 C10H12O2 164.0837 M4 C10H16N2 164.1315 3、同位素丰度比法 ① 组成有机化合物的主要元素C、H、O、N等均由相对丰度比一定的同位素所组成。 ② 大多数MS图中，如能见到稳定的分子离子峰[M]+.，则在高出其1-2个质荷比处可见到[M+1]+与[M+2]+的同位素峰。 ③对于一定的化合物，分子离子峰与其同位素峰的相对强度为一确定值。 同位素 原子质量 丰度比（%） 1H 1.007825 99.9855 2H 2.01410 0.0145 12C 12.000000 98.8292 13C 13.00335 1.1080 14N 14.00307 99.635 15N 15.00011 0.0365 ※ 化合物不饱和度u的计算 Ⅰ：一价原子（如X、H）的数目 Ⅲ：三价原子（如N、P）的数目 Ⅳ：四价原子（如C、S）的数目 （二）确定化合物结构类型和取代基的主要方法 1．注意观察试样在提取分离过程中的行为 2．测定其有关理化常数，如不同pH、不同 溶剂中的溶解度及色谱行为、灼烧实验、 化学定性反应等。 3. 结合文献调研。 4、官能团定性与定量分析 5、测定并解析化合物的有关光谱学数据 （三）红外光谱（IR） 1、红外光谱：研究分子运动的吸收光谱，反映 分子中原子间的振动和变角运动。 2、红外光谱所涉及的区域为中红外区，波长 在2-25μm之间，频率为5000-400cm-1. 3、波长与频率的关系如下： 4、分子振动类型 （1）伸缩振动：分为对称与不对称伸缩振动 （2）弯曲振动：分为面内与面外弯曲振动 5、红外光谱的吸收强度 基团极性越大，吸收强度就越大 6、红外光谱的分区 ◆ 4000～1500cm-1为特征频率区，每一 红外吸收峰都与一定的官能团相对应。. 例如： ①3600-3200cm-1出现强的宽峰， 表示有-OH存在； ② 2200-2100cm-1出现吸收峰， 表示可能有C≡N